Regulationsmechanismen der dehnungssensitiven Zwei-Porendomänen Kaliumkanäle K2P2.1 (TREK-1) und K2P10.1 (TREK-2):
Gespeichert in:
| Beteilige Person: | |
|---|---|
| Format: | Hochschulschrift/Dissertation Buch |
| Sprache: | Deutsch |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2021
|
| Ausgabe: | 1. Auflage |
| Schriftenreihe: | Edition Scientifique
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| Umfang: | VIII, 194 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm x 14.8 cm, 550 g |
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1.
EINLEITUNG
1
1.1.
LONENKANAELE
1
1.1.1.
KALIUMKANAELE
(STRUKTUR,
KLASSIFIZIERUNG,
NOMENKLATUR)
3
1.1.1.1.
EINWAERTSGLEICHRICHTENDE
KALIUMKANAELE
(2
TMS
/1
P)
6
1.1.1.2.
SPANNUNGSGESTEUERTE
KALIUMKANAELE
(6
TMS
/1
P)
7
1.1.1.3.
ZWEI-PORENDOMAENEN
KALIUMKANAELE
(4
TMS
/
2
PS)
9
1.1.1.3.1.
K
2
P2.1
(TREK-1)
UND
K
2P
10.1
(TREK-2)
-
EXPRESSION,
REGULATION
SOWIE
PHYSIOLOGISCHE
UND
PATHOPHYSIOLOGISCHE
RELEVANZ
12
1.1.1.3.2.
DER
CARBOXYL-TERMINUS
ALS
ESSENTIELLER
BESTANDTEIL
DER
KANALREGULATION
19
1.1.1.3.3.
EIN
GEN,
VIELE
KANALPROTEINE
-
DER
PROTEINDIVERSITAET
ZUGRUNDE
LIEGENDE
MECHANISMEN
22
1.2.
AKZESSORISCHE
SS-UNTEREINHEITEN
26
DIE
FAMILIE
DER
KVSS-UNTEREINHEITEN
26
1.3.
DER
SS-ADRENOZEPTOR
ANTAGONIST
CARVEDILOL
28
1.4.
MODELLORGANISMUS
XENOPUS
LAEVIS
31
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
ALS
EXPRESSIONSSYSTEM
33
1.5.
ELEKTROPHYSIOLOGIE
35
1.6.
FRAGESTELLUNGEN
UND
ZIELSETZUNG
DER
DISSERTATION
37
1.6.1.
HABEN
KVSS-UNTEREINHEITEN
EINEN
REGULATORISCHEN
EFFEKT
AUF
ZWEI-PORENDOMAENEN
KALIUMKANAELE?
37
1.6.2.
INWIEWEIT
KOMMT
DER
KOZAK-SEQUENZ
BEI
DER
DIFFERENZIELLEN
AUSBILDUNG
DER
ATI-VARIANTEN
BEI
K
2
P10.1
EINE
REGULATORISCHE
UND
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG
ZU?
38
1.6.3.
WERDEN
K
2P
2.1
UND
K
2P
10.1
PHARMAKOLOGISCH
DURCH
DEN
KOMBINIERTEN
(A,-,
SSI-,
SS
2
-)
ADRENOZEPTOR
ANTAGONISTEN
CARVEDILOL
BEEINFLUSST?
39
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
40
2.1.
MATERIAL
40
2.1.1.
GERAETE
40
2.1.2.
GEBRAUCHSMATERIALIEN
43
2.1.3.
VERBRAUCHSMATERIALIEN
44
2.1.4.
CHEMIKALIEN
45
2.2.
METHODEN
49
2.2.1.
MOLEKULARBIOLOGIE
49
2.2.1.1.
T
RANSFORMATION
52
2.2.1.2.
MINI-PRAEPARATION
53
2.2.1.3.
MAXI-PRAEPARATION
55
2.2.1.4.
LINEARISIERUNG
56
2.2.1.5.
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
58
2.2.1.6.
SUBKLONIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREFRAGMENTEN
60
2.2.1.7.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(POLYMERASE
CHAIN
REACTION)
63
2.2.1.7.1
.
EINFUEGEN
AKZESSORISCHER
TAG
ZUR
PROTEINMARKIERUNG
64
2.2.1.7.2.
IN
VITRO
MUTAGENESE
68
2.2.1.7.3.
DELETION
DES
N-TERMINUS
70
2.2.1.7.4.
EXPRESSIONSANALYSE
DER
HK2P10.1
ISOFORMEN
1-3
MITTELS
ORGANSPEZIFISCHER
CDNA
LIBRARIES
72
2.2.2.
KULTUR
UND
PRAEPARATION
DER
BIOLOGISCHEN
MATERIALIEN
74
2.2.2.1.
XENOPUS
LAEVIS
(AFRIKANISCHER
KRALLENFROSCH)
74
2.2.2.1.1.
ENTNAHME
UND
PRAEPARATION
DER
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
74
2.2.2.1.2.
MIKROINJEKTION
VON
MRNA
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
76
2.2.2.1.3.
PROTEINEXTRAKTION
AUS
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
77
2.2.2.2.
HUMANE
EMBRYONALE
NIERENZELLEN
(HUMAN
EMBRYONIC
KIDNEY
CELLS,
HEK293)
78
2.2.2.2.1.
KULTIVIERUNG
VON
HEK293
78
2.2.2.2.2.
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
HEK293
ZELLEN
80
2.2.2.2.3.
PROTEINEXTRAKTION
AUS
HEK293
ZELLEN
81
2.2.3.
ELEKTROPHYSIOLOGIE
82
2.2.3.1.
PRINZIP
DER
ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME
(VOLTAGE-CLAMP)
82
2.2.3.1.1.
ANGEWENDETE
SPANNUNGSPROTOKOLLE
84
2.2.3.2.
PATCH-CLAMP
TECHNIK
85
2.2.3.2.1.
ANGEWENDETE
SPANNUNGSPROTOKOLLE
87
2.2.3.3.
AUSWERTUNG
UND
STATISTIK
87
2.2.4.
BIOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGSMETHODEN
88
II
2.2.4.1.
GELELEKTROPHORESE
UND
WESTERN
BLOT
88
2.2.4.2.
CO-IMMUNOPRAEZIPITATION
92
2.2.4.3.
BIOTINYLIERUNG
94
3.
ERGEBNISSE
97
3.1.
REGULATION
DES
RATTENSPEZIFISCHEN
RK22.1
KANALS
DURCH
RATTENSPEZIFISCHE
RKVSS-UNTEREINHEITEN
97
3.1.1.
MODIFIZIERUNG
DER
AMPLITUDE
VON
RK2P2.1
STROEMEN
DURCH
COEXPRESSION
VON
RKVSS2
UNTEREINHEITEN
97
3.1.2.
BIOPHYSIKALISCHE
EFFEKTE
DER
RKVSS2
UNTEREINHEIT
AUF
TRANSMEM
BRANALE
RK
2
P2.1
STROEME
100
3.1.3.
COEXPRESSION
VON
RKVSS2
MIT
RK22.1
TRANSLATIONSVARIANTEN
102
3.1.4.
NACHWEIS
EINER
DIREKTEN
PROTEIN-PROTEIN
INTERAKTION
ZWISCHEN
RK
2
P2.1
UND
RKVSS2
104
3.1.5.
MODULATION
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
RK
2P
2.1
DURCH
COEXPRESSION
VON
RKVSS2
105
3.1.6.
BEEINFLUSSUNG
TRANSMEMBRANALER
RK
2P
2.1
STROEME
DURCH
RKVSSL,
RKVSS3
UND
RKVSS4
106
3.2.
GENETISCHE
REGULATION
DER
HK210.1
ATI-VARIANTEN
DURCH
DIE
KOZAK-SEQUENZ
109
3.2.1.
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
DER
HK
2
P10.1
SPLEISSVARIANTEN
109
3.2.2.
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
HK
2
P10.1
MITTELS
WESTERN
BLOT
ANALYSE
110
3.2.3.
REKOMBINATION
DER
TRANSLATIONSINITIATIONSSEQUENZ
113
3.2.4.
NACHWEIS
DER
ATI
IN
TRANSFIZIERTEN
SAEUGETIERZELLEN
(HEK293)
114
3.2.5.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DER
HK
2
P10.1
SPLEISSVARIANTEN
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
116
3.2.6.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
EINZELNER
HK
2
P10.1
A-UNTEREIN
HEITEN
DER
VERSCHIEDENEN
SPLEISSVARIANTEN
118
3.3.
PHARMAKOLOGISCHE
REGULATION
VON
HK
2
P2.1
UND
HK210.1
DURCH
CARVEDILOL
120
3.3.1.
INHIBITION
DER
HUMANEN
HK
2
P2.1
UND
HK
2
P10.1
KANAELE
DURCH
CARVEDILOL
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
120
3.3.2.
SENSITIVITAET
DER
IN
KULTIVIERTEN
HEK293
ZELLEN
EXPRIMIERTEN
HK
2P
2.1
UND
HK
2P
10.1
KANAELE
FUER
CARVEDILOL
127
III
3.3.3.
PHARMAKOLOGISCH
DIFFERENTIELLE
REGULATION
DER
HK2P2.1
UND
HK2P10.1
ATI-VARIANTEN
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
129
3.3.4.
UEBERPRUEFUNG
DES
DMSO
UND
ZEIT-EINFLUSSES
135
4.
DISKUSSION
137
4.1.
AKTIVIERUNG
VON
RK2P2.1
DURCH
RKVSS-UNTEREINHEITEN
137
4.1.1.
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
UND
POTENTIELLE
KLINISCHE
ANWENDUNGSMOEGLICHKEIT
140
4.1.2.
KRITISCHE
BEURTEILUNG
DER
VERWENDETEN
METHODIK
UND
AUSBLICK
140
4.1.3.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
141
4.2.
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
REGULIERT
DIE
MRNA
TRANSLATIONS
INITIATION
UND
DIE
FUNKTION
VON
HK210.1
KALIUMKANAELEN
141
4.2.1.
GEWEBSSPEZIFISCHE
EXPRESSION
DER
K2
P
10.1
ISOFORMEN
142
4.2.2.
HK
2
P10.1
UNTERLIEGT
DER
ATI
143
4.2.3.
SPLEISSEN
REGULIERT
DURCH
REKOMBINATION
EINER
KURZEN
5
NUKLEOTIDSEQUENZ
DIE
HK2P10.1
MRNA
TRANSLATIONSINITIATION.
144
4.2.4.
ATI
IST
AUCH
IN
SAEUGETIERZELLEN
NACHWEISBAR
144
4.2.5.
FUNKTIONELLE
AUSWIRKUNGEN
DER
ATI
145
4.2.6.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
147
4.3.
KONZENTRATIONSABHAENGIGE
INHIBITION
VON
HK2P2.1
UND
HK210.1
DURCH
CARVEDILOL
147
4.3.1.
BIOPHYSIKALISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
HK2P2.1
HEMMUNG
DURCH
CARVEDILOL
148
4.3.2.
ATI
BEEINFLUSST
DIE
PHARMAKOLOGISCHE
SENSITIVITAET
VON
K2P
KANAELEN
149
4.3.3.
PHARMAKOLOGISCHE
INHIBITION
VON
K
2
P-KANAELEN
ALS
THERAPEUTISCHER
ANSATZ
151
4.3.4.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
152
4.4.
RESUEMEE
UND
AUSBLICK
153
5.
ZUSAMMENFASSUNG
155
6.
SUMMARY
159
7.
LITERATURVERZEICHNIS
162
8.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
187
9.
TABELLENVERZEICHNIS
189
IV
10.
PUBLIKATIONSLISTE
190
10.1.
ORIGINALARBEITEN
190
10.2.
UEBERSICHTSARTIKEL
191
11.
DANKSAGUNG
192
12.
ERKLAERUNG
194
V
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