Semaphorin 3F reguliert endotheliale Inflammation bei der Entstehung der kardialen Fibrose:
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Freiburg im Breisgau
[2019?]
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|---|---|
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1.
EINLEITUNG
...................................................................................................................................................
8
1.1
HERZINSUFFIZIENZ
UND
KARDIALE
FIBROSE
..................................................................................................
8
1.1.1
HERZINSUFFIZIENZ
...............................................................................................................................
8
1.1.2
FORMEN
DER
HERZINSUFFIZIENZ
..........................................................................................................
9
1.1.3
DEFINITION
UND
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
KARDIALEN
FIBROSE
............................................................
10
1.1.4
ROLLE
DES
ENDOTHELS
BEI
DER
ENTWICKLUNG
EINER
KARDIALEN
FIBROSE
...........................................
12
1.2
VORARBEITEN
.......................................................................................................................................
13
1.3
EIGENSCHAFTEN
VON
SEMAPHORIN
3F
...............................................................................................
15
1.4
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
................................................................................................................
17
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.....................................................................................................................
18
2.1
MATERIALIEN
.............................................................................................................................................
18
2.1.1
GERAETE
..................................................................................................................................................
18
2.1.2
GEBRAUCHSMATERIALIEN
.........................................................................................................................
19
2.1.3
ZELLEN
UND
ZELLKULTURMEDIEN
............................................................................................................
20
2.1.4
STIMULATIONSREAGENZIEN
.....................................................................................................................
21
2.1.5
ZELLKULTURVERSUCHE
.............................................................................................................................
21
2.1.6
IMMUNZYTOLOGIE
.................................................................................................................................22
2.1.7
PRIMER
..................................................................................................................................................
22
2.1.8
ANTIKOERPER
..........................................................................................................................................
22
2.1.9
MAEUSE
..................................................................................................................................................
23
2.1.10
REAGENZIEN
FUER
MAUSVERSUCHE
.......................................................................................................
23
2.1.11
SONSTIGE
MATERIALIEN
........................................................................................................................
24
2.2
METHODEN
................................................................................................................................................
26
2.2.1
ZELLKULTUR
............................................................................................................................................
26
2.2.1.1
SPLITTEN
UND
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
.........................................................................
26
2.2.1.2
ZELLSTIMULATION
...........................................................................................................................
27
2.2.1.3
SIRNA
TRANSFEKTION
...................................................................................................................
28
2.2.2
RNA
ISOLATION
....................................................................................................................................
29
2.2.3
CDNA
SYNTHESE
..................................................................................................................................
30
2.2.4
QUANTITATIVE
REALTIME
PCR
(QRT
PCR)
..........................................................................................
31
2.2.5
PCR
PRIMER
........................................................................................................................................
35
2.2.6
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.................................................................................................................
35
2.2.7
PROTEINISOLATION
...................................................................................................................................36
2.2.8
WESTERN
BLOT
.......................................................................................................................................
37
2.2.8.1
BRADFORD
ASSAY
37
2.2.8.2
GELHERSTELLUNG
37
2.2.8.3
SDS
PAGE
ELEKTROPHORESE
38
2.2.8.4
TRANSFER
41
2.2.8.5
IMMUNDETEKTION
42
2.2.9
HYPOXIEVERSUCH
43
2.2.10
IMMUNZYTOLOGIE:
PECAM
(CD31)-FAERBUNG
44
2.2.11
TRANSWELL
45
2.2.11.1
ISOLATION
VON
PERIPHERAL
BLOOD
MONONUCLEAR
CELIS
(PBMCS)
46
2.2.11.2
ZELLSTIMULATION
IM
TRANSWELL
47
2.2.11.3
SIRNA
TRANSAKTION
IM
TRANSWELL
48
2.2.12
TIERVERSUCH
48
2.2.13
MIKROSKOPIE
49
2.2.14
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
49
3.
ERGEBNISSE
51
3.1
REGULATION
VON
SEMAPHORIN
3F
IM
KORONARENDOTHEL
51
3.1.1
SEMAPHORIN
3F
IST
IN
C57BL/6-MAEUSEN
NACH
TAK
HOCHREGULIERT
51
3.1.2
SEMAPHORIN
3F
IST
IM
KORONARENDOTHEL
UNTER
INFLAMMATION
(TNF-A)
HOCHREGULIERT
51
3.1.3
HYPOXIE
INDUZIERT
SEMAPHORIN
3F-EXPRESSION
IN
ENDOTHELZELLEN
52
3.2
EFFEKTE
VON
SEMAPHORIN
3F
53
3.2.1
SEMAPHORIN
3F
STEIGERT
DIE
PECAM-
1
-EXPRESSION
IM
KORONARENDOTHEL
53
3.2.2
SEMAPHORIN
3F
VERSTAERKT
TRANSENDOTHELIALE
LEUKOZYTENMIGRATION
IN
VITRO
56
3.2.3
SEMAPHORIN
3F
FUHRT
ZU
VERMEHRTER
REKRUTIERUNG
INFLAMMATORISCHER
ZELLEN
IN
DEN
ASZITES
57
3.2.4
VERLUST
VON
SEMAPHORIN
3F
FUHRT
ZU
REDUZIERTER
PECAM-
1
-EXPRESSION
IM
KORONARENDOTHEL
57
3.2.5
NACH
VERLUST
VON
SEMAPHORIN
3F
IST
DIE
TRANSENDOTHELIALE
LEUKOZYTENMIGRATION
VERMINDERT
60
4.
DISKUSSION
61
5.
ZUSAMMENFASSUNG
71
6.
LITERATURVERZEICHNIS
72
7.
PUBLIKATIONEN
82
8.
ANHANG
84
8.1
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
84
8.2
TABELLENVERZEICHNIS
84
8.3
DANKSAGUNG
86
3
8.4
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG
.......................................................................................................................
87
4
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