Analyse der substratabhängigen Motilität von Retinoblastomzellen mittels des Streifen-Assays:
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[Münster]
2018
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I
EINLEITUNG.......................................................................................................................................1
1 B
LASTOME
...............................................................................................................................................1
2 D
AS
R
ETINOBLASTOM
...........................................................................................................................
1
2.1 D
EFINITION
UND
E
PIDEMIOLOGIE
.......................................................................................................1
2.2 G
ENETIK
................................................................................................................................................
2
2.3 K
LINIK
DES
R
ETINOBLASTOMS
............................................................................................................
3
3 M
ALIGNITAETSKRITERIEN
DES
R
ETINOBLASTOMS
..............................................................................
6
3.1 W
ACHSTUMSMUSTER
...........................................................................................................................6
3.2 I
NVASIVES
W
ACHSTUM
DES
R
ETINOBLASTOMS
..................................................................................6
3.3 I
NFILTRIERENDES
R
ETINOBLASTOM
...................................................................................................8
4 R
HO
A
ABHAENGIGE
I
NVASIONSMECHANISMEN
...................................................................................
9
4.1 K
OMPONENTEN
DER
Z
ELLMIGRATION
................................................................................................
9
4.2 D
IE
B
EDEUTUNG
VON
R
HO
GTP
ASEN
...............................................................................................10
4.3 ROCK I
NHIBITION
.............................................................................................................................
11
5 M
IGRATIONS
-
UND
I
NVASIONSASSAYS
..............................................................................................
12
5.1 S
TREIFEN
-A
SSAY
................................................................................................................................13
6 Z
IELE
DER
P
ROMOTIONSARBEIT
........................................................................................................13
II
MATERIAL UND
METHODEN.......................................................................................................
15
1 A
UFLISTUNG
VERWENDETER
M
ATERIALIEN
....................................................................................
15
1.1 V
ERWENDETE
C
HEMIKALIEN
/ E
NZYME
...........................................................................................
15
1.2 VERWENDETE
GERAETE......................................................................................................................16
1.3 V
ERWENDETE
Z
ELLLINIEN
................................................................................................................
18
1.4 H
ERGESTELLTE
P
UFFER
/ M
EDIEN
/ S
USPENSIONEN
.......................................................................19
2 V
ERSUCHSMATERIAL
..........................................................................................................................
2 0
2.1 V
ERSUCHSTIERE
UND
G
EWEBEGEWINNUNG
.....................................................................................20
2.2 B
IOMATRIX
.........................................................................................................................................
22
2.3 F
OTOMETRISCHE
B
ESTIMMUNG
DES
P
ROTEINGEHALTS
.................................................................
22
3 Z
ELLKULTUR
........................................................................................................................................23
3.1 V
ERWENDETE
Z
ELLLINIEN
................................................................................................................
23
3.2 H
ANDHABUNG
MIT
Z
ELLKULTUREN
.................................................................................................
24
3.3 K
RYOKONSERVIERUNG
.......................................................................................................................24
3.4 A
UFTAUEN
..........................................................................................................................................24
3.5 N
EUBAUER
Z
AEHLKAMMER
.................................................................................................................
25
4 MTT-V
ITALITAETSASSAY
....................................................................................................................
25
4.1 P
RIN ZIP
...............................................................................................................................................25
4.2 A
RBEITSSCHRITTE
..............................................................................................................................
26
5 A
DHAESIONSASSAY
................................................................................................................................2
7
5.1 P
R IN ZIP
...............................................................................................................................................27
5.2 A
RBEITSSCHRITTE
..............................................................................................................................
27
6 S
TREIFEN
-A
SSAY
..................................................................................................................................2
9
6.1
VORBEREITUNG..................................................................................................................................29
6.2 A
RBEITSSCHRITTE
..............................................................................................................................
32
6.3 P
ROZESS
DER
S
TREIFENENTSTEHUNG
..............................................................................................35
6.4 K
ONTROLLVERSUCHE
.........................................................................................................................37
6.5 UEBERBLICK DER EXPERIMENTE MITTELS DES STREIFEN-ASSAYS
..................................................
38
7 S
TATISTIK
.............................................................................................................................................
4 0
7.1 S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
DES
MTT-V
ITALITAETSASSAYS
.........................................................40
7.2 S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
DES
A
DHAESIONSASSAYS
....................................................................41
7.3 S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
DES
S
TREIFEN
-A
SSAYS
.....................................................................41
III
ERGEBNISSE....................................................................................................................................4
4
1 E
TABLIERUNG
DES
A
RBEITSMODELLS
................
4 4
2 MTT-V
ITALITAETSASSAY
....................................................................................................................
4 4
2.1 A
USWERTUNG
DER
Z
ELLLINIE
WERI-R
B
I
.....................................................................................
44
2.2 A
USWERTUNG
DER
Z
ELLLINIE
Y79..................................................................................................
46
2.3 Z
USAMMENFASSUNG
DES
MTT-V
ITALITAETSASSAYS
........................................................................49
3 A
DHAESIONSASSAY
...............................................................................................................................
4 9
3.1 A
USWERTUNG
DER
Z
ELLLINIE
WERI-R
B
I
......................................................................................51
3.2 A
USWERTUNG
DER
Z
ELLLINIE
Y79..................................................................................................
55
3.3 Z
USAMMENFASSUNG
DES
A
DHAESIONSASSAYS
..................................................................................59
4 S
TREIFEN
-A
SSAY
..................................................................................................................................61
4.1 D
IE
ZEITLICH
-
EXPERIMENTELLE
DER
E
TABLIERUNG
DES
A
RBEITSMODELLS
...............................
61
4.2 E
RSTE
H
AUPTVERSUCHSREIHE
.........................................................................................................62
4.3 V
ERSUCHSANSAETZE
DER
ZWEITEN
H
AUPTVERSUCHSREIHE
MIT
ROCK I
NHIBITOR
......................
75
IV
DISKUSSION....................................................................................................................................82
1 F
RAGESTELLUNG
..................................................................................................................................82
2 K
RITISCHE
B
ETRACHTUNG
DER
M
ETHODEN
...................................................................................8
3
2.1
MTT-VITALITAETSASSAY....................................................................................................................
83
2.2
ADHAESIONSASSAY..............................................................................................................................
83
2.3
S
TR E IFE N
-A
SSAY
.............................................................................................................
84
3 I
NTERPRETATION
DER
EIGENEN
E
RGEBNISSE
..................................................................................8
8
3.1
K
OHAERENZ
EIGENER
E
R G E B N ISSE
......................................................................................
88
3.2
V
ERGLEICH
M IT
ANDEREN
F
ORSCHUNGSERGEBNISSEN
.........................................................
93
4 S
CHLUSSFOLGERUNG
/ K
LINISCHE
B
EDEUTUNG
..............................................................................9
9
5
A
USBLICK
............................................................................................................................................
1 0 1
V
LITERATURVERZEICHNIS..............................................................................................................
1 0 3
VI
DANKSAGUNG....................................................................................................................................1
1 8
VII
ANHANG..............................................................................................................................................1
1 9
1 B
EURTEILUNG
DER
F
ILTERMEMBRANEN
........................................................................................1
1 9
VIII
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...................................................................................................
1 2 0
IX
LEBENSLAUF......................................................................................................................................1
2 2
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