Kicken wie die Weltmeister:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | Deutsch Niederländisch |
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München
arsEdition
[2018]
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ZUSAMMENFASSUNG II
ABSTRACT III
ABKUERZUNGEN VIII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS X
1. EINLEITUNG 1
1.1 ANATOMIE UND FUNKTION DER NIERE 2
1.2 DAS VASOPRESSIN- (AVP) SYSTEM 4
1.3 AVP INDUZIERTES TRAFFICKING VON AQP2 IM SAMMELROHR 6
1.3.1 CAMP VERMITTELTE SIGNALKASKADE 6
1.3.2 ROLLE DES ZYTOSKELETTS 6
1.3.3 ROLLE DER INTRAZELLULAEREN KALZIUMOSZILLATION 8
1.4 ANXA2 UND PLL
8
1.4.1 ANXA2 - EIN MITGLIED DER ANNEXIN FAMILIE 8
1.4.2 PLL
(S100A10) - EIN MITGLIED DER S100 FAMILIE 10
1.4.3 AI IXA2-PLL-TETRAMER
- TRANSPORTFUNKTION 11
1.4.4 REGULATION DES TRANSPORTS 12
1.4.4.1 REGULATION DES TRANSPORTS DURCH KALZIUM 13
1.4.4.2 REGULATION DES TRANSPORTS DURCH PHOSPHORYLIERUNG 13
1.5 DIE BRATTLEBORO RATTE ALS TIERMODELL FUER DEN
ZENTRALEN DIABETES INSIPIDUS 15
1.6 ZIELE
16
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2. MATERIALIEN 17
2.1 ANTIKOERPER 17
2.2 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 17
2.3 RESTRIKTIONSENZYME 18
2.4 GERAETE 19
2.5 KITS 20
2.6 KOMPETENTE E.COLI BAKTERIEN 20
2.7 SOFTWARE 20
2.8 SONDEN, PRIMER, VEKTOREN 21
2.9 VERBRAUCHSMATERIALIEN 21
3. METHODEN 23
3.1 TIEREXPERIMENTE 23
3.1.1 VERSUCHSTIERE UND BEHANDLUNG 23
3.1.1.1 BRATTLEBORO RATTEN 23
3.2 PROTEINANALYTISCHE METHODEN 23
3.2.1 IMMUNHISTOLOGIE UND IMMUNZYTOLOGIE 23
3.2.1.1 HERSTELLUNG VON KRYOSTATSCHNITTEN 23
3.2.1.2 HERSTELLUNG VON PARAFFIN
SCHNITTEN 24
3.2.1.3 FAERBUNG VON IMMUNHISTOLOGISCHEN PRAEPARATEN 24
3.2.2 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE (TEM) 25
3.2.2.1 HERSTELLUNG VON ULTRA-KRYO SCHNITTEN 25
3.2.2.2 IMMUNGOLDMARKIERUNG VON ULTRA-KRYO SCHNITTEN 26
3.2.3 HERSTELLUNG VON NIERENLYSATEN AUS RATTEN FUER
KO-
IMMUNPRAEZIPITATIONEN 26
3.2.4 KO-IMMUNPRAEZIPITATION 27
3.2.5 EXPRESSION VON REKOMBINANTEN PROTEINEN 27
3.2.6 AUFREINIGUNG VON GST-FUSIONSPROTEINEN 29
3.2.6.1 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE IM BATCH-VERFAHREN 29
3.2.6.2 HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHIE (HPLC) 30
3.2.7 PEPTID SPOT ARRAY 31
IV
3.2.7.1 HERSTELLUNG VON PEPTID SPOTS 31
3.2.7.2 BINDUNGSSTUDIEN: REKOMBINANTE PROTEINE UND PEPTID SPOT ARRAY 32
3.2.8 NATRIUM-DODECYL-SULFAT-POLY-ACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE) 33
3.2.9 WESTERNBLOT (IMMUNBLOT) 34
3.2.10 COOMASSIE-BRILLANT-BLAU FAERBUNG 35
3.3 MOLEKULARGENETISCHE METHODEN 36
3.3.1 GENEXPRESSIONSANALYSE 36
3.3.1.1 RNA EXTRAKTION MITTELS SAEULENAUFREINIGUNG 36
3.3.1.2 CDNA SYNTHESE 36
3.3.1.3 QUANTITATIVE REALTIME PCR MITTAQMAN SONDEN 37
3.3.2 KLONIERUNG UND VEKTORWAHL 39
3.3.2.1 PRIMERDESIGN 40
3.3.2.2 PCR (POLYMERASE-CHAIN-REACTION) 42
3.3.2.3 OVERLAP-EXTENSION-PCR ZUR ZIELGERICHTETEN MUTAGENESE 43
3.3.2.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 44
3.3.2.5 GELEXTRAKTION VON PCR PRODUKTEN 45
3.3.2.6 RESTRIKTIONSVERDAU VON PLASMIDEN UND PCR PRODUKTEN 45
3.3.2.7 LIGATION VON PLASMIDEN UND PCR PRODUKTEN 46
3.4 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 46
3.4.1 HERSTELLUNG KOMPETENTER E.COLI STAEMME 46
3.4.2 TRANSFORMATION VON KOMPETENTEN BAKTERIEN MIT REKOMBINANTEN
PLASMIDEN 46
3.4.3 PLASMID PRAEPARATION 47
3.5 STATISTIK 47
4. ERGEBNISSE 49
4.1 ANXA2 LOKALISATION IN DER NIERE 49
4.1.1 ANXA2 LOKALISATION IN RENALEN GEFAESSEN 49
4.1.2 ANXA2 LOKALISATION IN RENALEN TUBULUSABSCHNITTEN 51
4.1.3 ANXA2 EXPRESSION IN RENALEN TUBULUSABSCHNITTEN 52
V
4.1.4 ZUSAMMENFASSUNG DER ANXA2 DISTRIBUTION IN RENALEN
TUBULUSABSCHNITTEN 53
4.2 MODELLORGANISMUS BRATTLEBORO RATTE 55
4.2.1 ANXA2 LOKALISATION IN RENALEN TUBULUSABSCHNITTEN DER BRATTLEBORO
RATTE 56
4.2.2 ANXA2 EXPRESSION IN DER INNEREN MEDULLA VON DDAVP-BEHANDELTEN
BRATTLEBORO RATTEN 58
4.3 TRANSLOKATION VON ANXA2 IM SAMMELROHR VON
DDAVP- BEHANDELTEN BRATTLEBORO RATTEN 59
4.4 PROTEIN-PROTEIN INTERAKTION 62
4.4.1 INTERAKTION ZWISCHEN ANXA2 UND AQP2 64
4.4.2 INTERAKTION ZWISCHEN PHOSPHO-ANXA2 UND AQP2 67
4.4.3 PLL
TRANSLOKATION IM SAMMELROHR VON DDAVP-BEHANDELTEN
BRATTLEBORO RATTEN 68
4.4.4 INTERAKTION ZWISCHEN PLL, ANXA2 UND AQP2 69
4.5 VERIFIKATION UND BEWERTUNG DER PROTEIN-PROTEIN
INTERAKTION 72
5. DISKUSSION 74
ANXA2-LOKALISATION IN RENALEN STRUKTUREN 74
BEZIEHUNG ZWISCHEN AQP2- UND ANXA2-EXPRESSION 75
ANXA2 UND PLL
SIND IN VIVO AM TRANSLOKATIONSPROZESS VON AQP2
BETEILIGT 76
DAS ANXA2-PLL-TETRAMER
UND PLL
BINDEN DIREKT AN AQP2 76
DER PHOSPHOSTATUS VON ANXA2 SPIELT EINE ROLLE BEI DER
INTERAKTION
MIT AQP2 78
SPEKULATIONEN ZUR ROLLE VON ANXA2 BEI DER TRANSLOKATION VON AQP2 80
AUSBLICK 83
6. LITERATURVERZEICHNIS 85
VI
PUBLIKATIONEN, KONGRESSBEITRAGE UND
AUSZEICHNUNGEN
FEHLER! TEXTMARKE NICHT DEFINIERT.
LEBENSLAUF
FEHLER! TEXTMARKE NICHT DEFINIERT.
VII
|
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