Therapie des präklinischen CNGB1-defizienten Mausmodells der Retinitis pigmentosa mittels rekombinanter AAV-Vektoren:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I EINLEITUNG
1 R ETINITIS PIGMENTOSA
2 C N G B 1 -DEFIZIENTE MAEUSE ALS MODELL FUER RETINITIS PIGMENTOSA
3 G ENERSATZTHERAPIE
4 ADENO- ASSOZIIERTE V IREN
II ZIELSETZUNG DER ARBEIT
III MATERIAL UND METHODEN
1 C HEMIKALIEN, L OESUNGEN UND P UFFER
2 V ERWENDETE M AUSLINIE
3 G ENOTYPISIERUNG
3.1 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA FIIR DIE GENOTYPISIERUNG
3.2 POLYMERASEKETTENREAKTION FIIR DIE GENOTYPISIERUNG
3.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER DNA-FRAGMENTE
4 KLONIERUNG DES P A A V 2 . 1 -RHO-MCNGB1A-SV40-VEKTORS
4.1 , POLYMERASEKETTENREAKTION FIIR DIE KLONIERUNG
4.2 AUFREINIGUNG DER DNA-FRAGMENTE
4.3 PLASMID PAAV2.1 -MCS
4.4 RESTRIKTION
4.5 LIGATION
4.6 TRANSFORMATION
4.7 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA MITTELS ALKALISCHER LYSE
5 H ERSTELLUNG DES R H O - M C N G B 1A R A A V - V E K T O R S
5.1 TRANSFEKTION
5.2 ERNTE
5.3 AUFREINIGUNG DER RAAV-VEKTOREN UEBER EINEN IODIXANOL-GRADIENTEN
5.4 AUFREINIGUNG DER RAAV-VEKTOREN MITTELS
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
5.5 KONZENTRIERUNG UND UMSALZUNG DER RAAV-VEKTOREN
5.6 RAAV-TITERBESTIMMUNG MITTELS QUANTITATIVER REAL-TIME PCR
6 S UBRETINALE I NJEKTION
7 W ESTERN B LOT
7.1 PROTEINISOLATION AUS RETINA-GEWEBE
7.2 SDS-PAGE UND WESTERN BLOT
8 E LEKTRORETINOGRAMM
9 I MMUNHISTOCHEMIE
9.1 PRAEPARATION DER RETINA
9.2 ANFERTIGUNG VON KRYO-GEWEBESCHNITTEN
9.3 IMMUNHISTOCHEMIE
9.4 MIKROSKOPIE
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