Prionen-Schnelltests und Risikoabschätzung von TSE-Infektionen bei Cerviden in Deutschland:
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Berlin
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
ABBILDUNGEN 5
TABELLEN 5
DIAGRAMME 6
ABKUERZUNGEN 7
Z U S A M M E N F A S S U N G 9
ABSTRACT 10
1. EINLEITUNG 1 2
1.1 DEFINITION PRION 12
1.1.1 PHYSIOLOGISCHE PRIONPROTEINE 12
1.1.2 PATHOLOGISCHE PRIONPROTEINE 13
1.2 TRANSMISSIBLE SPONGIFORME ENZEPHALOPATHIEN (TSE) 13
1.3 CHRONIC WASTING DISEASE (CWD) 15
1.3.1 HISTORIE 16
1.3.2 SYMPTOMATIK 16
1.3.3 UEBERTRAGBARKEIT 1 7
1.4 BIOLOGIE D E R CERVIDAE 1 8
1.4.1 ALLGEMEINE BIOLOGIE 1 8
1.4.2 SYSTEMATIK D E R CERVIDAE 2 0
1.4.3 SPEZIELLE BIOLOGIE D E R CERVIDEN DEUTSCHLANDS 2 1
1.4.4 SPEZIELLE BIOLOGIE D E R CERVIDEN NORDAMERIKAS 2 2
1.5 PRP-POLYMORPHISMUS BEI CERVIDEN 2 3
1.6 PRION-NACHWEISMETHODEN 2 5
1.6.1 IMMUNHISTOCHEMIE 2 6
1.6.2 WESTERNBLOT 2 7
1.6.3 ELISA/LIA 2 7
1.6.4 I M M U N C H R O M A T O G R A P H I E 2 8
1.7 DIE BEDEUTUNG VON SENSITIVITAET UND SPEZIFIZITAET FUERTSE-TESTS 2 8
1.8 PMCA 2 9
1.9 ZIEL D E R ARBEIT 3 1
2. MATERIAL UND METHODEN 3 3
2.0 PROBENVORBEREITUNG Z U R ARBEIT MIT PRIONEN 3 3
2.1 PRIONENSCHNELLTESTVERFAHREN 3 3
2.1.1 BIO-RAD TESEE ELISA 3 5
2.1.1.1 ARBEITSSCHRITTE FUER BIO-RAD TESEE ELISA 3 6
2.1.2 BIO-RAD TESEE S H E E P / G O A T ELISA 3 9
2.1.2.1 ARBEITSSCHRITTE FUER BIO-RAD TESEE S H E E P / G O A T ELISA 4 0
2.1.3 PRIONICS-CHECK LIA 4 2
2.1.3.1 ARBEITSSCHRITTE FUER PRIONICS-CHECK LIA 4 3
2.1.4 R-BIOPHARM PRIONSCREEN 4 5
2.1.4.1 ARBEITSSCHRITTE FUER R-BIOPHARM PRIONSCREEN 4 6
2.1.5 PRIONICS-CHECK PRIOSTRIP 4 8
2.1.5.1 ARBEITSSCHRITTE FUER PRIONICS-CHECK PRIOSTRIP 4 9
2 . 1 . 6 BIO-RAD TESEE WESTERNBLOT 5 0
2.1.6.1 ARBEITSSCHRITTE FUER BIO-RAD TESEE WESTERNBLOT 5 1
3
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INHALTSVERZEICHNIS
2 . 1 . 7 PRIONICS-CHECK WESTERN 5 4
2.1.7.1 ARBEITSSCHRITTE FUER PRIONICS-CHECK WESTERN 5 5
2.2 BEWERTUNG D E R TESTERGEBNISSE 5 9
2.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG 5 9
2.4 PMCA Z U R IN W TRO-AMPLIFIZIERUNG VON PRP CWD U N D PRP SC 6 0
2.4.1 PMCA-PROTOKOLL 6 0
3 . ERGEBNISSE 62
3.1 NACHWEIS VON PRP RES A M E R I K A N I S C H E R CERVIDEN 6 2
3.1.1 EPIDEMIOLOGISCHE SENSITIVITAET FUER PRP RES A M E R I K A N I S C H
E R CERVIDEN 6 2
3.1.2 ANALYTISCHE SENSITIVITAET FUER PRP RES A M E R I K A N I S C H E R
CERVIDEN 6 4
3.1.2.1 ANALYTISCHE PRP RES -SENSITIVITAETEN D E R BIO-RAD-SYSTEME 6 5
3 . 1 . 2 . 2 ANALYTISCHE PRP RES -SENSITIVITAETEN D E R PRIONICS-SYSTEME
6 7
3 . 1 . 2 . 3 ANALYTISCHE PRP RES -SENSITIVITAET D E S R-BIOPHARM
PRIONSCREEN 6 9
3.1.3 TEST-MODIFIKATIONEN ZUR SENSITIVITAETSSTEIGERUNG 7 0
3.1.3.1 VERDOPPLUNG D E R ANTIKOERPERINKUBATIONSZEITEN 7 1
3 . 1 . 3 . 2 PRP-PRAEZIPITATION MITTELS ZENTRIFUGATION 7 2
3 . 1 . 3 . 3 ANTIKOERPERAFFINITAETEN FUER PRP RES A M E R I K . U. PRP C D
T . C E R V I D E N 7 3
3.2 NACHWEIS VON PRP C D E U T S C H E R CERVIDEN 7 7
3.2.1 EPIDEMIOLOGISCHE SPEZIFIZITAET FUER PRP C D E U T S C H E R CERVIDEN
7 7
3.2.2 ANALYTISCHE SENSITIVITAET FUER PRP D E U T S C H E R CERVIDEN 7 9
3.3 PMCA-VERSUCHE ZUR IN VITRO-VERMEHRUNG VON PRP RES IN CERVIDEN 8 2
4 . DISKUSSION 8 7
4.1 EPIDEMIOLOGISCHE SENSITIVITAET FUER PRP RES A M E R I K A N I S C H E
R CERVIDEN 8 8
4 . 2 ANALYTISCHE SENSITIVITAET FUER PRP RES A M E R I K A N I S C H E R
CERVIDEN 9 0
4.2.1 TEST-MODIFIKATIONEN Z U R STEIGERUNG D E R ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET F. PRP RES A M E R I K A N I S C H E R CERVIDEN 9 1
4 . 3 ANTIKOERPERAFFINITAETEN FUER PRP RES A M E R I K A N . UND PRP C D E
U T S C H E R CERVIDEN 9 2
4 . 4 EPIDEMIOLOGISCHE SPEZIFIZITAET FUER PRP C D E U T S C H E R CERVIDEN
9 4
4.5 ANALYTISCHE SENSITIVITAET FUER PRP C D E U T S C H E R CERVIDEN 9 5
4 . 6 PMCA-VERSUCHE Z U R IN W TRO-VERMEHRUNG VON PRP RES IN CERVIDEN 9
5
4 . 7 AUSBLICK 100
5 . LITERATURVERZEICHNIS 101
ANHANG 1 1 0
PUBLIKATIONEN 1 1 8
DANKSAGUNG 1 2 0
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 1 2 3
4
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