Verfügbarkeit: Die Rolle von microRNAs im Prostatakarzinom

Die Rolle von microRNAs im Prostatakarzinom:

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Bibliographische Detailangaben
Beteilige Person:	Nolte, Elke (VerfasserIn)
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adam_text	IMAGE 1 INHALTSVERZEICHNIS I INHALTSVERZEICHNIS 1 SUMMARY 1 2 ZUSAMMENFASSUNG 3 3 EINLEITUNG 5 3.1 DIE PROSTATA 5 3.2 DAS PROSTATAKARZINOM 5 3.2.1 EPIDEMIOLOGIE DES PROSTATAKARZINOMS 5 3.2.2 RISIKOFAKTOREN FUER DIE ENTSTEHUNG EINES PROSTATAKARZINOMS 6 3.2.3 KLASSIFIKATION DES PROSTATAKARZINOMS 6 3.2.3.1 GLEASON SCORE 6 3.2.3.2 TNM-KLASSIFIKATION DES PROSTATAKARZINOMS 8 3.2.4 GENETIK DES PROSTATAKARZINOMS 9 3.2.5 BIOMARKER ZUR DIAGNOSTIK DES PROSTATAKARZINOM 10 3.3 MICRORNAS 11 3.3.1 PROZESSIERUNG UND FUNKTION 11 3.3.2 MIRNAS UND KREBS 13 4 HYPTHESEN UND ARBEITSPROGRAMM 17 5 ERGEBNISSE 19 5.1 VERGLEICH DER MIRNA EXPRESSIONSPROFILE IN PROSTATATUMORGEWEBEN UND KORRESPON DIERENDEM NORMALGEWEBE 19 5.1.1 ERSTELLUNG EINES MIRNA EXPRESSIONSPROFILS IM PROSTATAKARZINOM UND PROSTA TANORMALGEWEBE MITTELS DEEP SEQUENCING 19 5.1.2 VALIDIERUNG DER RELATIVEN EXPRESSION VON MIRNAS, WELCHE IM DEEP SEQUEN CING ALS DEREGULIERT GEFUNDEN WURDEN, IN DEN PROSTATAZELLLINIEN 20 5.1.3 ANALYSE DER REFERENZGENSTABILITAET 22 5.1.4 MIRNA EXPRESSION IN PROSTATAPRIMAERGEWEBEN 23 5.1.5 MIRNA MICROARRAY 26 5.2 DATENBANKANALYSE ZUR AUSWAHL POTENTIELLER ZIEL-MRNAS 31 5.2.1 MRNA EXPRESSION VON MIRNA ZIELGENEN IN DEN PROSTATAZELLLINIEN 33 5.2.2 MRNA EXPRESSION VON MIRNA ZIELGENEN IN PROSTATAPRIMAERGEWEBEN . . . . 34 5.2.3 PROTEINEXPRESSION VON SEC23A IN DEN PROSTATAPRIMAERGEWEBEN 36 HTTP://D-NB.INFO/1029841713 IMAGE 2 II INHALTSVERZEICHNIS 5.3 FUNKTIONELLE ANALYSE DES MIRNA- KNOCKDOWN VON MIR-200C UND MIR-375 IN DU145 UND LNCAP ZELLEN 38 5.3.1, ANALYSE VON PROLIFERATION, VIABILITAET, APOPTOSE UND ZYTOTOXIZITAET NACH MIRNA- KNOCKDOWN 38 5.3.2 WUNDHEILUNGSASSAY NACH MIRNA- KNOCKDOWN 40 5.3.3 INVASIONS- UND MIGRATIONSVERHALTEN NACH MIRNA KNOCKDOWN 40 5.4 FUNKTIONELLE ANALYSE DER EKTOPEN EXPRESSION BZW. DES KNOCKDOWNS VON SEC23A IN DU145 UND LNCAP ZELLEN 43 5.4.1 ANALYSE VON PROLIFERATION, VIABILITAET, APOPTOSE UND ZYTOTOXIZITAET NACH EKTOPER EXPRESSION BZW. KNOCKDOWN VON SEC23A 43 5.4.2 WUNDHEILUNGSASSAY NACH EKTOPER EXPRESSION BZW. KNOCKDOWN VON SEC23A 44 5.4.3 INVASION- UND MIGRATIONSVERHALTEN NACH EKTOPER EXPRESSION BZW. KNOCK DOWN VON SEC23A 44 5.5 MIRNA IN SITU HYBRIDISIERUNG 49 5.6 DIAGNOSTISCHES POTENTIAL VON MIRNAS 51 5.7 ASSOZIATION VON MIRNA EXPRESSIONSPROFILEN UND KLINISCH-PATHOLOGISCHEN PARAMETERN 54 5.8 ERG ALS ZIELGEN DER MIR-145 55 5.8.1 ERG MRNA EXPRESSION IN PROSTATAZELLLINIEN UND PRIMAEREN PROSTATAGEWEBEN 55 5.8.2 ERG PROTEIN EXPRESSION IN PROSTATAZELLLINIEN UND PRIMAEREN PROSTATAGEWEBEN 57 5.8.3 DER ERG GENFUSIONSSTATUS BEEINFLUSST DIE ERG MRNA EXPRESSION 58 5.8.4 KORRELATION VON MIR-145 UND ERG MRNA- UND PROTEINEXPRESSION 59 5.8.5 ANALYSE DES EINFLUSSES VON ERG-2 KNOCKDOWN UND EKTOPER EXPRESSION VON MIR-145 AUF PROLIFERATION, APOPTOSE UND INVASION 61 6 DISKUSSION 63 6.1 MIRNA PROFILERSTELLUNG IM PROSTATAKARZINOM 64 6.2 MIRNA ZIELGENANALYSEN 65 6.2.1 SEC23A ALS ZIELGEN DER MIRNAS MIR-200C UND MIR-375 65 6.2.2 M Y 0 6 ALS ZIELGEN DER MIRNAS MIR-143 UND MIR-145 7 1 6.2.3 REGULATION VON ERG DURCH MIR-145 71 6.3 DIAGNOSTISCHES POTENTIAL VON MIRNAS 73 6.4 AUSBLICK 75 7 MATERIAL 77 7.1 CHEMIKALIEN 77 7.2 REAGENZIEN FUER DIE ZELLKULTUR 77 7.3 TRANSFEKTIONSREAGENZIEN 78 7.4 ANTISENSE OLIGONUKLEOTIDE 78 7.5 ANTIKOERPER 79 7.6 MIRCURY LNA MICRORNA DETECTION PROBES FOR IN SITU HYBRIDIZATION 79 IMAGE 3 INHALTSVERZEICHNIS III 7.7 GERAETE 79 7.8 VERBRAUCHSMATERIALIEN 80 7.9 KOMMERZIELL ERHAELTLICHE KITS 80 7.10 TAQMAN MICRORNA ASSAYS 81 7.11 TAQMAN GENE EXPRESSION ASSAYS 81 7.12 OLIGONUCLEOTIDE 82 7.13 EXPRESSIONSVEKTOREN 82 7.14 SOFTWARE 83 7.15 PRIMAERGEWEBE 84 8 METHODEN 89 8.1 RNA EXTRAKTION 89 8.1.1 RNA EXTRAKTION MIT GUANIDINIUM THIOCYANATE-PHENOL-CHLOROFORM (TRIZOL) AUS KRYOKONSERVIERTEM PRIMAERGEWEBE UND ZELLKULTUR 89 8.1.2 RNA ISOLATION AUS FORMALIN-FIXIERTEM, PARAFFIN EINGEBETTETEM GEWEBE MIT DEM MASTERPURE COMPLETE DNA AND RNA PURIFICATION K I T (EPICENTRE BIOTECHNOLOGIES, MADISON, W L ) 89 8.1.3 RNA EXTRAKTION MIT DEM MIRVANA* MIRNA ISOLATION KIT 90 B.2 PHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER RNA KONZENTRATION 9 1 8.3 DNASEL BEHANDLUNG 91 8.4 CDNA SYNTHESE 91 8.4.1 MIRNA SPEZIFISCHE CDNA SYNTHESE 92 8.4.2 CDNA SYNTHESE VON GESAMT-RNA 92 8.4.2.1 CDNA SYNTHESE MIT DEM TAQMAN MRNA REVERSE TRANSCRIPTION KIT (APPLIED BIOSYSTEMS) 92 8.4.2.2 CDNA SYNTHESE MIT DEM DYNAMO* CDNA SYNTHESE K I T . . . . 92 8.5 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR (QRT-PCR) 93 8.5.1 QRT-PCR MIT TAQMAN ASSAYS 93 8.5.2 QRT-PCR MIT SYBR GREEN I 95 8.6 ZELLKULTUR 96 8.6.1 ZELLLINIEN 96 8.6.2 KULTIVIEREN UND PASSAGIEREN VON ZELLEN 97 8.6.3 AUFTAUEN VON ZELLEN 97 8.6.4 EINFRIEREN VON ZELLEN 97 8.6.5 PASSAGIEREN VON ZELLEN 97 8.6.6 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 98 8.6.7 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON DNA 98 8.6.8 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON MIRNA ANTISENSE OLIGONUKLEOTIDEN 98 8.6.9 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON ANTISENSE OLIGONUKLEOTIDEN ZUR VERHINDERUNG DER GENEXPRESSION VON MYOSIN VI, SEC23A UND ERG2 99 IMAGE 4 IV INHALTSVERZEICHNIS 8.7 FUNKTIONELLE ANALYSEN 99 8.7.1 MIGRATION UND INVASION 99 8.7.2 WUNDHEILUNGSASSAY 100 8.7.3 ANALYSE DER VIABILITAET - M T T ASSAY 101 8.7.4 ANALYSE DER PROLIFERATION - BRDU-ELISA 102 8.7.5 ANALYSE DER ZYTOTOXIZITAET - LDH-TEST 102 8.7.6 ANALYSE DER APOPTOSE - CASPASE 3 / 7 ASSAY 103 8.8 MIRNA IN SITU HYBRIDISIERUNG 104 8.9 MIRNA MICROARRAY 105 8.10 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 106 8.10.1 GEWINNUNG VON ZELLLYSATEN MIT GUANIDINIUM THIOCYANATE-PHENOL-CHLOROFORM (TRIZOL) AUS CRYOKONSERVIERTEM PRIMAERGEWEBE UND ZELLKULTUR 106 8.10.2 MESSUNG DER PROTEINKONZENTRATION (BCA) 106 8.10.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN 107 9 LITERATUR 109 10 ANHANG 125 10.1 ABKUERZUNGEN 125 10.2 PLASMIDKARTEN 128 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 131 TABELLENVERZEICHNIS 133 EIGENE PUBLIKATIONEN, WISSENSCHAFTLICHE VORTRAEGE UND POSTERPRAESENTATIONEN 135 DANKSAGUNG 137
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