Inhibition der EGFR-Signalkaskade und Prädiktion der Sensitivität gegenüber niedermolekularen Inhibitoren im nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinom:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.0 Zielsetzung 1
1.1 Das Bronchialkarzinom 1
1.1.1 Epidemiologie 1
1.1.2 Ätiologie 1
1.1.3 Histologie 2
1.1.4 Genetik des NSCLC 2
1.1.5 Staging und Prognose des NSCLC 3
1.1.6 Symptomatik des NSCLC 4
1.1.7 Diagnosestellung des NSCLC 4
1.1.8 Konventionelle Therapie des NSCLC 4
1.1.8.1 Frühstadium 4
1.1.8.2 Lokal fortgeschrittenes Stadium 5
1.1.8.3 Fortgeschrittenes Stadium 5
1.1.9 Gezielte Therapie des NSCLC mit EGFR-Inhibitoren 6
1.1.9.1 EGFR-Inhibitoren 6
1.1.9.2 Rationale für die Inhibition des EGFR 8
1.1.9.3 Kinasen 9
1.1.9.4 Struktur und Liganden des EGFR 9
1.1.9.5 Signaltransduktion 10
1.1.9.6 EGFR als Onkogen 10
1.1.9.7 Signalwege des EGFR 11
1.1.9.7.1 PI3K 12
1.1.9.7.2 AKT 13
1.1.9.7.3 mTOR 13
1.1.9.7.4 PTEN 14
1.1.9.8 Rationale für die Inhibition der EGFR-Signalkaskade 14
1.1.9.9 Gezielte Inhibition der EGFR-Signalkaskade 15
1.1.9.9.1 AKT-Inhibition 15
1.1.9.9.2 mTOR-lnhibition 15
1.1.9.10 Prädiktion des Therapieerfolgs bei Behandlung
mit niedermolekularen Substanzen 16
1.1.9.10.1 Prädiktion des Ansprechens bei Behandlung
mit EGFR-Inhibitoren 16
1.1.9.10.2 Prädiktion des Ansprechens bei Inhibitoren der
EGFR-Kaskade 17
2. Material und Methoden 18
2.1 Material 18
2.1.1 Zellen 18
2.1.2 Antikörper 19
2.1.3 Inhibitoren 19
2.1.4 Primer 20
2.1.5 Lysepuffer 21
2.2 Methoden 21
2.2.1 Passagieren der Zellen 21
2.2.2 Kryokonservierung der Zellen 22
2.2.3 Zellen auftauen 22
2.2.4 Isolation von Proteinen 22
2.2.5 Bestimmung der Proteinkonzentration 23
2.2.6 Auftrennung von Proteinen (SDS-Page) 2^
2.2.7 Western Blot 23
2.2.8 Immunologischer Nachweis von Proteinen 24
2.2.9 Messung der Zellapoptose 24
2.2.10 Präparation von DNA 25
2.2.11 Isolation von RNA 25
2.2.12 Synthese von cDNA 26
2.2.13 Polymerasekettenreaktion (PCR) 27
2.2.14 Sequenzieren 27
2.2.15 Die RealTime(RT)-PCR 28
2.2.16 XTT Proliferationsassay 28
2.2.16.1 Zellviabilitätsmessung mit XTT 2B
2.2.16.2 Ermittlung der Wachstumskinetik 29
2.2.16.3 Proliferationsassay bei Monotherapie 29
2.2.16.4 Proliferationsassay bei Kombinationstherapie 3°
3. Ergebnisse 31
3.1 Genetische Charakterisierung der NSCLC und ihrer Sensitivität
gegenüber der Inhibition mit EGFR-TKI 31
3.2 Inhibition der EGFR-Signalkaskade in EGFR-TKI resistenten
NSCLC-Zelllinien 37
3.3 Proteine der EGFR-Signalkaskade als prädiktive Marker für die
Sensitivität gegenüber EGFR-, AKT- und mTOR-lnhibitoren 45
3.4 EGR1-RNA-Expression korreliert nicht mit der Expression des
Proteins PTEN 49
3.5 Kombinierter Angriff der EGFR-AKT-mTOR-Kaskade 50
4. Diskussion 55
5. Zusammenfassung 61
6. Literaturverzeichnis 62
7. Lebenslauf 71
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