Experimentelle Untersuchungen zum Einsatz der Multiphotonen-Multicolor-Fluoreszenz in situ Hybridisierung für dreidimensionales Gen-Imaging und zur optischen Chromosomenbearbeitung:
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2007
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Inhaltsverzeichnis
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS III
Zusammenfassung VII
1 EINLEITUNG 1
1.1 Fluoreszenz in situ Hybridisierung 1
1.2 Fluoreszenzanregung 6
1.3 multiphotonen-multicolor-fish 10
1.4 Schneiden mit Laserpulsen 11
1.5 Ziele der Arbeit 14
2 MATERIAL UND METHODEN 15
2.1 DNA SONDEN 15
2.2 Fluoreszenz in situ Hybridisierung an Metaphasen 17
2.3 Fluoreszenz in situ Hybridisierung an Paraffinschnitten 22
2.4 auswertung am multiphotonen-laser-mlkroskop 24
2.5 anfertigung von schnitten auf folienbeschichteten deckgläsern
(nanodissektion) 27
2.6 Zeitaufgelöste Messung von Fluoreszenzen 28
2.7 Fluoreszenzverhalten bei Variation der Anregungswellenlänge 29
2.8 Geräte und Chemikalien 30
3 ERGEBNISSE 34
3.1 zweiphotonen-fluoreszenzanregungsverhalten von fish-fluorophoren bei
variablen anregungswellenlängen 34
3.2 Zeitaufgelöste Messung von FISH-Fluorophoren in Metaphase-Chromosomen ..
39
3.3 Dreidimensionale MM-FISH an Nierenbiopsien 43
3.4 SPECTRAL IMAGING VON MM-FISH-SlGNALEN 49
3.5 Nachweis einer Trisomie 17 mittels MM-FISH in der Biopsie eines Follikulären
schilddrüsencarcinomes 55
3.6 Optische Chromosomen-Isolation mittels Femtosekundenlaser 57
4 DISKUSSION 65
4.1 Anregungsverhalten von FISH-Fluorophoren bei verschiedenen
Anregungswellenlängen 65
4.2 zeitaufgelöste messung von fish-fluorophoren in metaphase-chromosomen
66
4.3 dreidimensionale mm-fish an nierengewebe 68
4.4 spectral imaging von mm-fish-slgnalen 70
4.5 Nachweis einer Trisomie 17 in der Biopsie eines Follikulären
schilddrüsencarcinomes mittels mm-fish 71
4.6 Optische Chromosomen-Isolation mittels Femtosekundenlaser 72
4.7 schlussfolgerungen 74
5 LITERATUR- UND QUELLENVERZEICHNIS 76
Inhaltsverzeichnis VI
6 ANHANG 86
Lebenslauf 86
Danksagung 87
Ehrenwörtliche Erklärung 88
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