Evaluation von Clara Cell 16-(CC16) und Glutathion-S-Transferase P1-(GSTP1) Polymorphismen bei Frühgeborenen mit bronchopulmonaler Dsyplasie:
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Inhaltsverzeichnis 3
Abbildungsverzeichnis 6
Abkürzungsverzeichnis 7
1 EINLEITUNG 9
1.1 Definition und Begriffsbestimmung der BPD 9
1.1.1 Inzidenz 13
1.1.2 Klinisches Erscheinungsbild 14
1.1.3 Lungenentwicklung 15
1.1.4 Pathologie 15
1.1.5 Ätiologie und Pathogenese 17
1.1.5.1 Frühgeburtlichkeit und Unreife 18
1.1.5.2 Maschinelle Beatmung 18
1.1.5.3 Sauerstofftoxizität 18
1.1.5.4 Lungenödem und persistierender Ductus arteriosus 19
1.1.5.5 Surfactantmangel 20
1.1.5.6 Infektionen 21
1.1.5.7 Entzündungsreaktion 22
1.1.5.8 Genetische Prädisposition 22
1.2 Genetik komplexer Krankheitsbilder 23
1.2.1 Kandidatengenstudien bei chronisch entzündlichen Lungenerkrankungen ....23
1.2.1.1 Das Kandidatengen Clara Cell Protein (CC16) 24
1.2.1.2 Das Kandidatengen GSTP1 25
2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 27
3 MATERIALIEN, STUDIENPOPULATION UND METHODEN 28
3.1 Materialien, Geräte 28
3.1.1 Verbrauchsmaterialien 29
3.1.2 Reagenzien und Chemikalien 30
3.1.3 Enzyme und Pufferlösungen 30
3.1.4 Primer und Sonden 30
3.2 Studienpopulationen 31
3.2.1 Frühgeborene mit sehr niedrigem Geburtsgewicht (VLBW FG) 31
3.2.2 Definitionen der BPD und BPD Schweregrad 32
3
3.3 Methoden 33
3.3.1 DNA Extraktion aus getrockneten Blutproben 33
3.3.2 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) 34
3.3.3 Schmelzkurvenanalysen 37
3.3.3.1 Schmelzkurvenanalysen für CC16 A38G 39
3.3.3.2 Schmelzkurvenanalysen für GSTP1 104 lle Val 41
3.3.3.3 Schmelzkurvenanalysen für GSTP1 113Ala Val 43
3.3.4 Statistische Auswertung 44
4 ERGEBNISSE 45
4.1 Häufigkeiten und Schweregrad der BPD 45
4.2 CC16A38G 46
4.2.1 Ergebnisse der Assoziationsanalysen CC16A38G (Abb. 14a f) 47
4.2.2 Schweregrad der BPD und CC16 438G Genotypverteilung 49
4.3 GSTP1 104lle Val 50
4.3.1 Ergebnisse der Assoziationsanalysen GSTP1 104 lle Val (Abb. 16 a f) 51
4.3.2 Schweregrad der BPD und GSTP1 104 //e /a/ Genotypverteilung 53
4.4 GSTP1 113Ala Val 54
4.4.1 Ergebnisse der Assoziationsanalysen GSTP1 113 Ala Val (Abb. 18a f) 55
4.4.2 Schweregrad der BPD und GSTP1 773/ /a /a/ Genotypverteilung 57
5 DISKUSSION 58
5.1 Die Bedeutung von CC16 bei Lungenerkrankungen 58
5.1.1 Pathophysiologische Untersuchungen zum Clara Cell Protein 58
5.1.2 Genetische Untersuchungen zum CC16A38G 59
5.2 CC16undBPD 60
5.3 Die Bedeutung von GSTP1 bei anderen Lungenerkrankungen 61
5.3.1 Pathophysiologische Untersuchungen zum Glutathion und den Glutathion S
Transferasen 62
5.3.2 Genetische Untersuchungen (GSTP1) 62
5.4 GSTP1 und BPD 63
5.5 Genetik der BPD 65
5.5.1 Familien und Zwillingsstudien 65
5.5.2 Kandidatengenstudien zur BPD 65
5.5.3 Kandidatengene für chronisch entzündliche Lungenerkrankungen im
Kindesalter 67
4
5.6 Gen Umwelt Interaktionen 68
5.7 Gen Gen Interaktionen 69
5.8 Ethnische Heterogenität 69
6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 71
7 LITERATUR 73
8 DANKSAGUNG 83
9 LEBENSLAUF 84
5
Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Röntgen Thoraxaufnahme eines Frühgeborenen
Abbildung 2: Radiologische Stadien der BPD
Abbildung 3a c: Histologische Präparate
Abbildung 4: Pathogenese der bronchopulmonalen Dysplasie
Abbildung 5: Histologisches Präparat einer Clara Zelle
Abbildung 6: Screeningkarte
Abbildung 7: Schematischer Ablauf einer Polymerase Ketten Reaktion
Abbildung 8: Signalentstehung durch zwei Sonden
Abbildung 9: Sonden Missmatch
Abbildung 10: Hybrid Stabilität
Abbildung 11: CC16 A38G Mutationsanalysen
Abbildung 12: GSTP1 104 //e /a/ Mutationsanalysen
Abbildung 13: GSTP1 7?3 4/a /a/ Mutationsanalysen
Abbildung 14a h: CC16A38G und BPD
Abbildung 15a,b: CC16A38G und Schweregrad der bronchopulmonalen Dysplasie
Abbildung 16a h: GSTP1 104 lle Val
Abbildung 17a,b: GSTP1 104 lle Val und Schweregrad der bronchopulmonalen
Dysplasie
Abbildung 18a h: GSTP1113Ala Val
Abbildung 19a,b: GSTP1 113Ala Val und Schweregrad der bronchopulmonalen
Dysplasie
6
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