Evaluation disseminierter Pankreaszellen durch qualitative und quantitative Analyse von Cytokeratin-19-mRNA in Blut, Knochenmark und Peritoneallavage von Patienten mit duktalem Adenokarzinom des Pankreas oder chronischer Pankreatitis:
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| adam_text | Titel: Evaluation disseminierter Pankreaszellen durch qualitative und quantitative Analyse von Cytokeratin-
Autor: Hoffmann, Katrin
Jahr: 2006
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 7
1.1. Pankreaskarzinom 7
1.2. Chronische Pankreatitis 8
1.3. Minimale residuale Tumorerkrankung 9
1.4. Cytokeratin 19 11
1.5. Fragestellung 12
2. Material und Methoden 13
2.1. Patienten 13
2.2. Materialgewinnung 15
2.3. Molekularbiologische Methoden 15
2.3.1. Isolierung der RNA 15
2.3.2. Konzentrationsbestimmung der RNA 16
2.3.3. Reverse Transkription der RNA zu cDNA 17
2.3.4. TaqMan Primer-und Sondensequenzen 17
2.3.5. Vektorprimer 18
2.3.6. Primerkontrolle in der PCR und elektrophoretischer Produktnachweis 18
2.3.7. Aufreinigung des PCR-Produkts 19
2.3.8. Klonierung 19
2.3.9. Transfektion 19
2.3.10. Identifikation positiver Klone und Isolierung der Vektor-DNA 20
2.3.11. Kultivierung positiv identifizierter Kolonien und Plasmidpräparation 21
2.3.12. Sequenzierung des Plasmids 22
2.3.13. Linearisierung und Quantifizierung der Vektor-DNA 22
2.3.14. Anfertigung der Standardverdünnungen für die TaqMan PCR 23
2.3.15. Funktionsprinzip der TaqMan PCR 23
2.3.16. Fluorogene PCR-Sonden und ihre Farbstoffe 26
2.3.17. Verwendete Materialen für die TaqMan PCR 27
2.3.18. Berechnung der Expressionsveränderungen 28
2.4. Nested-PCR 28
2.5. Statistische Analyse 29
3
3. Ergebnisse 31
3.1. Auswertung quantitative TaqMan RT-PCR 31
3.1.1. Beta-Actin Expression 31
3.1.2. Cytokeratin 19 Expression im Referenzmaterial 31
3.1.3. Cytokeratin 19 Expression beim Pankreaskarzinom 32
3.1.3.1. Expression in den Kompartimenten 32
3.1.3.2. Expression im zeitlichen Verlauf 33
3.1.3.3. Cytokeratin 19 Positivität 33
3.1.3.4. Cytokeratin 19 Expression im Blut präoperativ 33
3.1.3.5. Cytokeratin 19 Expression im Blut intraoperativ 34
3.1.3.6. Cytokeratin 19 Expression im Blut am postoperativ 1. Tag 35
3.1.3.7. Cytokeratin 19 Expression im Blut 10. Tag postoperativ 36
3.1.3.8. Cytokeratin 19 Expression im Knochenmark 36
3.1.3.9. Cytokeratin 19 Expression in der Peritoneallavage 37
3.1.4. Korrelation der Cytokeratin 19 Expression mit Tumorstadien 37
3.1.5. Überlebensanalyse 39
3.1.6. Cytokeratin 19 Expression bei chronischer Pankreatitis 40
3.1.6.1. Expression in den Kompartimenten 40
3.1.6.2. Expression im zeitlichen Verlauf 41
3.1.6.3. Cytokeratin 19 Positivität 41
3.1.6.4. Cytokeratin 19 Expression im Blut präoperativ 42
3.1.6.5. Cytokeratin 19 Expression im Blut intraoperativ 42
3.1.6.6. Cytokeratin 19 Expression im Blut 1. Tag postoperativ 42
3.1.6.7. Cytokeratin 19 Expression im Blut 10. Tag postoperativ 43
3.1.6.8. Cytokeratin 19 Expression im Knochenmark 43
3.1.6.9. Cytokeratin 19 Expression in der Peritoneallavage 44
3.1.7. Vergleich Pankreaskarzinom und chronische Pankreatitis 45
3.1.7.1. Cytokeratin 19 Expression im Blut präoperativ 45
3.1.7.2. Cytokeratin 19 Expression im Blut intraoperativ 45
3.1.7.3. Cytokeratin 19 Expression im Blut postoperativ 1. Tag 46
3.1.7.4. Cytokeratin 19 Expression im Blut postoperativ 10. Tag 47
3.1.7.5. Cytokeratin 19 Expression im Knochenmark 49
Cytokeratin 19 Expression in der Peritoneallavage 50
Auswertung qualitative nested-PCR 50
Cytokeratin 19 Expression in den Kompartimenten 50
Cytokeratin 19 Expression und Korrelation mit den Tumorstadien 51
Diskussion 53
Problematik des mRNA Nachweises 54
Cytokeratin 19 und Pankreaskarzinom 55
Zusammenhang zwischen CK 19, Tumorstadien und
klinischem Verlauf 59
3.4. Differenzierung zwischen Pankreaskarzinom und
chronischer Pankreatitis 60
3.5. Perspektiven 61
4. Zusammenfassung 63
5. Literaturverzeichnis 66
3.1.7.6
3.2.
3.2.1.
3.2.2.
3.
3.1.
3.2.
3.3.
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