Isolierung und Charakterisierung von Allenoxid-Synthase-Genen aus Kartoffel und Tomate sowie Untersuchungen zur Funktion der Allenoxid-Synthase in der Jasmonsäurebiosynthese durch Überexpression und Repression in transgenen Pflanzen:
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| Sprache: | Deutsch |
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1997
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1.1. EINFUEHRUNG 1 1.1.1.
PFLANZENHORMONE 1 1.1.2. JASMONSAEURE S 1.1.2.1. STRUKTUR DER JASMONSAEURE
5 1.1.2.2. DIE BIOSYNTHESE DER JASMONSAEURE, EINE KASKADE DER
ALLENOXID-SYNTHASE 6 1.1.2.3. DIE SYNTHESEKASKADEN DER
HYDROPEROXID-LYASE UND PEROXYGENASE 9 1.1.2.4. VORKOMMEN UND EFFEKTE DER
JASMONSAEURE 10 1.1.2.5. JASMONSAEURE UND GENEXPRESSION 11 1.1.2.6.
JASMONSAEURE ALS EIN REGULATOR 12 1.1.2.7. IST JASMONSAEURE ODER
JASMONSAEUREMETHYLESTER DIE AKTIVE SUBSTANZ? WIE WIRKT DAS HORMON? 14
1.1.3. DIE ALLENOXID-SYNTHASE (AOS) 15 1.2. ZIEL DER ARBEIT 2. MATERIAL
UND. 2.1. MATERIAL 2.1.1. 2.1.2. 2.1.3. 2.1.3.1. 2.1.3.2. 2.1.4. 2.1.5.
2.1.6. 2.2. METHODEN 2.2.1. 2.2.2. 2.2.3. 2.2.4. 2.2.5. METHODEN
CHEMIKALIEN UND ENZYME SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOETIDE MEDIEN
PFLANZENMEDIEN BAKTERIENMEDIEN BAKTERIENSTAEMME VEKTOREN PFLANZEN
KLONIERUNG TRANSFORMATION VON AGROBACTERIUM TUMEFACIENS TRANSFORMATION
VON PFLANZEN ANZUCHT VON PFLANZEN DNA-ANALYSE ( DNA-BLOT-ANALYSE ) 17 19
19 20 21 21 22 23 23 23 24 24 24 24 24 25 2.2.6. RNA-ANALYSE
( RNA-BLOT-ANALYSE ) 25 2.2.7. REINIGUNG VON DNA-FRAGMENTEN 26 2.2.8.
RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 26 2.2.9. PCR-AMPLIFIZIERUNG
26 2.2.10. DURCHMUSTERUNG VON CDNA-BAENKEN 26 2.2.11.
SDS-POIYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE) 27 2.2.12. PROTEIN-ANALYSE
( PROTEIN-BLOT-ANALYSE ) 27 2.2.13. SEQUENZIERUNG VON CDNA 28 2.2.14.
BESTIMMUNG DER AOS-AKTIVITAET 28 2.2.15. EXTRAKTION UND BESTIMMUNG VON
JASMONSAEURE 29 2.2.16. EXTRAKTION UND BESTIMMUNG VON WASSERSTOFFPEROXID
29 2.2.17. WASSERSTRESS UND WASSERPOTENTIALMESSUNG 30 2.2.18. VERWUNDUNG
VON PFLANZEN 31 2.2.19. ISOLIERUNG VON CHLOROPLASTEN 31 2.2.20.
PETIOLENEXPERIMENTE 32 2.2.21. PRAEPARATION VON BLATTSCHNITTEN FUER TEM,
ANTIKOERPER- GOLD-MARKIERUNG 32 2.2.21.1. CHEMISCHE FIXIERUNG, EINBETTUNG
32 2.2.21.2. TEM UND ANTIKOERPER-GOLD-MARKIERUNG 32 2.2.22.
UEBEREXPRESSION DER AOS AUS TOMATE IN E.COLI 33 3. JLRSEBNISSE 3.1.
CHARAKTERISIERUNG DER ALLENOXID-SYNTHASE (AOS) AUS FLACHS 34 3.1.1.
AOS-GENEXPRESSION IN UNBEHANDELTEN FLACHSPFLANZEN 34 3.1.2.
AOS-TRANSKRIPTSPIEGEL NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 35 3.1.3.
AOS-TRANSKRIPTSPIEGEL NACH JASMONSAEUREBEHANDLUNG 37 3.1.4.
JASMONSAEURESPIEGEL NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 38 3.1.5. DER EFFEKT VON
ASPIRIN AUF DIE JASMONSAEUREBIOSYNTHESE 39 3.1.5.1. JASMONSAEUREPIEGEL VOR
UND NACH MECHANISCHER VER- WUNDUNG 39 3.1.5.2. AOS-AKTIVITAET 41 3.1.5.3.
AOS-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VER- WUNDUNG 42 3.2.
ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON AOS-CDNAS AUS KARTOFFEL UND TOMATE
43 3.2.1. ISOLIERUNG UND SEQUENZIERUNG VON AOS-CDNAS AUS KARTOFFEL UND
TOMATE 43 3.2.2. UEBEREXPRESSION DER TOMATEN-AOS-CDNA IN E. COLI 46
3.2.3. REGULIERUNG DER AOS-TRANSKRIPTION IN KARTOFFEL UND TOMATE 48
3.2.3.1. TRANSKRIPTSPIEGEL IN VERSCHIEDENEN ORGANEN 48 3.2.3.2.
TRANSKRIPTSPIEGEL NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 49 3.2.3.3. DER EFFEKT
VON VERBINDUNGEN AUS DEM JASMONSAEURE- BIOSYNTHESEWEG AUF DIE
AOS-TRANSKRIPTIONSRATE 51 3.2.3.4. DER EFFEKT VON VERSCHIEDENEN
STRESSBEDINGUNGEN AUF DIE AOS-TRANSKRIPTIONSRATE 53 3.3. UEBEREXPRESSION
DER ALLENOXID-SYNTHASE-CDNA AUS FLACHS IN TRANS- GENEN KARTOFFELPFLANZEN
55 3.3.1. KONSTRUKTION 55 3.3.2. SUCHEN NACH ERFOLGREICH TRANSFORMIERTEN
PFLANZEN 56 3.3.3. ANALYSE VON JUNGEN TRANSGENEN KARTOFFELPFLANZEN 58
3.3.3.1. JASMONSAEURESPIEGEL IN BLAETTERN TRANSGENER PFLANZEN 58 3.3.3.2.
PIN2- UND PAOS-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 59
3.3.3.3. SUSY-, TAS-14- UND PAOS-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH
WASSERSTRESS 61 3.3.3.4. WASSERSTATUS IN BLAETTERN TRANSGENER PFLANZEN 63
3.3.3.5. JASMONSAEURESPIEGEL NACH VERWUNDUNG UND TROCKENSTRESS 64 3.3.4.
ANALYSE VON AELTEREN TRANSGENEN KARTOFFELPFLANZEN 66 3.3.4.1. PHAENOTYP 66
3.3.4.2. JASMONSAEURESPIEGEL IN JUNGEN UND ALTEN BLAETTERN TRANSGENER
PFLANZEN 69 3.3.4.3. TRANSKRIPTSPIEGEL VERSCHIEDENER GENE 71 3.3.4.4.
PHOTOSYNTHESE 74 3.3.4.5. WASSERSTOFFPEROXIDSPIEGEL IN VERSCHIEDEN ALTEN
BLAETTERN TRANSGENER PFLANZEN 76 3.3.4.6. LOKALISIERUNG DER FLACHS-AOS IN
BLAETTERN TRANSGENER KARTOFFELPFLANZEN 79 3.3.4.7.
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 80 3.3.5. KNOLLENANALYSE
(35S-PROMOTOR) 82 3.3.5.1. NACHWEIS DES FLACHSPROTEINS 82 3.3.5.2.
PHAENOTYP 83 3.3.5.3. JASMONSAEURESPIEGEL 84 3.3.5.4. TRANSKRIPTSPIEGEL
VERSCHIEDENER GENE 84 3.3.5.5. AOS-AKTIVITAET IN KNOLLEN 85 3.3.6.
KNOLLENANALYSE (B33-PROMOTOR) 86 3.4. UEBEREXPRESSION DER FLACHS-AOS-CDNA
IN TRANSGENEN TOMATEN- PFLANZEN 87 3.4.1. KONSTRUKTION 87 3.4.2. SUCHEN
NACH ERFOLGREICH TRANSFORMIERTEN PFLANZEN 87 3.4.3. JASMONSAEURESPIEGEL
VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 88 3.4.4. MAOS- UND PIRUE
-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH 3.4.5. MECHANISCHER VERWUNDUNG PHAENOTYP
3.5. ANTISENSE REPRESSION DER ENDOGENEN ALLENOXID-SYNTHASE IN TRANS-
GENEN KARTOFFEL- UND TOMATENPFLANZEN 3.5.1. 3.5.1.1. 3.5.1.2. 3.5.1.3.
3.5.1.4. 3.5.2. 3.5.2.1. 3.5.2.2. 3.5.2.3. 3.5.2.4. 4. NISKNSSINN
KARTOFFEL KONSTRUKTION SUCHEN NACH ERFOLGREICH TRANSFORMIERTEN PFLANZEN
JASMONSAEURESPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG PAOS-
UNDPM2-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG TOMATE
KONSTRUKTION SUCHEN NACH ERFOLGREICH TRANSFORMIERTEN PFLANZEN
JASMONSAEURESPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG MAOS-
UNDPM2-TRANSKRIPTSPIEGEL VOR UND NACH MECHANISCHER VERWUNDUNG 89 90 90
91 91 92 92 93 94 94 95 95 96 4.1. DIE CHARAKTERISIERUNG DER
ALLENOXID-SYNTHASEN AUS FLACHS, KARTOFFEL UND TOMATE 98 4.2. ASPIRIN ALS
INHIBITOR DER JASMONSAEUREBIOSYNTHESE 102 4.3. JASMONSAEURE ALS EIN
STRESSSIGNAL 105 4.4. DIE UEBEREXPRESSION DER FLACHS-AOS-CDNA IN
KARTOFFEL- UND TOMATEN- PFLANZEN 106 4.5. DIE REPRESSION DER ENDOGENEN
ALLENOXID-SYNTHASE IN KARTOFFEL- UND TOMATEN- ANTISENSE -PFLANZEN 112 5.
ZUSAMMENFASSUNG 114 6. LITERATURVERZEICHNIS 116 ANHANG AB S. 135
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| title | Isolierung und Charakterisierung von Allenoxid-Synthase-Genen aus Kartoffel und Tomate sowie Untersuchungen zur Funktion der Allenoxid-Synthase in der Jasmonsäurebiosynthese durch Überexpression und Repression in transgenen Pflanzen |
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