Neue Testsysteme zur Untersuchung antagonistischer Pilze und Sekundärstoffe aus antagonistischen und mycophilen Pilzen:
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| Format: | Hochschulschrift/Dissertation Buch |
| Sprache: | Deutsch |
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1996
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3
NEUE TESTSYSTEME ZUR UNTERSUCHUNG ANTAGONISTISCHER PILZE UND
SEKUNDAERSTOFFE AUS ANTAGONISTISCHEN UND MYCOPHILEN PILZEN
VOM FACHBEREICH BIOLOGIE DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN
ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN
GENEHMIGTE
DISSERTATION
(D386)
VORGELEGT VON
GUDRUN SCHNEIDER
*** * V - R;
VORSITZENDER:
1. BERICHTERSTATTERIN:
2. BERICHTERSTATTER:
PROF. DR. H. HUBER
PROF. DR. H. ANKE
PROF. DR. J. CULLUM
TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE: 22. NOVEMBER 1996
KAISERSLAUTEM 1996
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 MATERIAL UND METHODEN 6
2.1 CHEMIKALIEN 6
2.2 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 8
2.2.1 NAEHRMEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 8
2.2.2 MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 10
2.2.3 PUFFER-UND SALZLOESUNGEN 11
2.3 ORGANISMEN 12
2.3.1 BEARBEITETE PILZSTAEMME 12
2.3.2 TESTORGANISMEN FUER DIE BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 13
2.3.2.1 BAKTERIEN UND PILZE 13
2.3.2.2 TESTPFLANZEN 14
2.3.2.3 NEMATODEN 14
2.3.2.4 ZELLINIEN 14
2.4 UNTERSUCHUNGEN ZUM PILZ-PILZ-ANTAGONISMUS 15
2.4.1 SCREENING NACH ANTAGONISTEN (DUALER ANTAGONISTENTEST) 15
2.4.2 DUALER ANTAGONISTENTEST (MODIFIZIERT) 15
2.4.3 ANTIBIOSE 16
2.4.3.1 REINOCULATION -. 16
2.4.3.2 EXTRAKTION DES NAEHRBODENS 16
2.4.3.3 LOKALISATION DER ANTIBIOTISCHEN AKTIVITAET 16
2.4.4 ENZYMATISCHE TESTS 17
2.4.4.1 CHITINASE-NACHWEIS NACH REISSIG 17
2.4.4.1.1 ENZYMNACHWEIS IM CHITINMEDIUM : 17
2.4.4.1.2 ENZYMNACHWEIS IM ANTAGONISTENTEST 17
2.4.4.2 CHITINASE-NACHWEIS MIT 4-METHYLUMBELLIFERYL-N-ACETYLGLUCOSAMIN
18 2.4.4.2.1 SUBSTRAT-TESTPLATTEN 18
2.4.4.2.2 CHITINASE-NACHWEIS IM FESTMEDIUM 18
2.4.5 ANTAGONISTENTEST MIT ERBSENKEIMLINGEN.. * 18
2.4.6 ERBSENKEIMUNGSTEST 19
2.4.6.1 PATHOGENITAET DER RHIZOCTONIA SOLANI-STAEMME 19
2.4.6.2 ERMITTLUNG DER ANTAGONISTISCHEN AKTIVITAET IN VIVO 19
2.5 FERMENTATION UND SCREENING VON PILZEN 20
2.5.1 SCREENING NACH ANTIFUNGISCHEN WIRKSTOFFEN 20
2.5.2 FERMENTATION UND HERSTELLUNG VON ROHEXTRAKTEN ZUR AUFREINIGUNG DER
WIRKSTOFFE 20
2.5.3 FERMENTATIONSANALYSEN. 21
2.5.3.1 GLUCOSE-/MALTOSEBESTIMMUNG. 21
2.5.3.2 PH-WERT 22
2.5.3.3 MYCELTROCKENGEWICHT 22
2.5.3.4 ABGASANALYTIK 22
2.5.3.5 SEKUNDAERSTOFFBESTIMMUNG MITTELS ANALYTISCHER HPLC 22
2.5.4 FERMENTATION IN STANDKULTUR 23
2.6 METHODEN ZUR REINIGUNG UND PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN CHARAKTERISIERUNG
DER SEKUNDAERSTOFFE 23
2.6.1 SAEULENCHROMATOGRAPHIE 23
2.6.2 PRAEPARATIVE HPLC 23
2.6.3 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 24
2.6.4 ELEKTROPHORESE 25
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.6.5 HPLC-ANALYSE 25
2.6.6 SPEKTROSKOPIE 26
2.6.7 DERIVATISIERUNGEN 26
2.7 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 27
2.7.1 AGARDIFFUSIONSTEST (BIOAUTOGRAPHIE) 27
2.7.2 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION IM
REIHENVERDUENNUNGSTEST (MIC) 27
2.7.3 CYTOTOXIZITAETSTEST 28
2.7.3.1 SUSPENSIONSKULTUR 28
2.7.3.2 MONOLAYERKULTUR 29
2.7.4 EINBAU RADIOAKTIVER VORSTUFEN IN SAEUREFAELLBARES MATERIAL IN VIVO
29
2.7.4.1 HL60-ZEUEN . 29
2.7.4.2 NEMATOSPORA CORYLI 30
2.7.5 PFLANZENKEIMUNGSTEST 31
2.7.6 NEMATODEN 31
2.7.7 HAEMOLYSETEST 31
2.7.8 NBT-DIFFERENZIERUNGSTEST 31
2.7.9 THROMBOCYTENAGGREGATIONSTEST 32
2.7.10 HEMMUNG DER HTV-1 REVERSEN TRANSKRIPTASE 32
2.7.11 HEMMUNG DER SEKRETORISCHEN PHOSPHOLIPASE A 2 32
3 ERGEBNISSE: TESTSYSTEME ZUR UNTERSUCHUNG ANTAGONISTISCHER PILZE 33
3.1 DUALER ANTAGONISTENTEST 33
3.2 VARIATION DES TESTSYSTEMS 34
3.3 MORPHOLOGIE 37
3.4 ANTIBIOTIKAPRODUKTION IM DUALEN ANTAGONISTENTEST 41
3.4.1 REINOCULATION MIT RHIZOCTONIA SOLANI 43-4 41
3.4.2 ANTIBIOTISCHE AKTIVITAET IM NAEHRBODEN DES DUALEN ANTAGONISTENTESTS
42 3.4.3 LOKALISATION DER ANTIBIOTIKABILDUNG 44
3.5 ENZYTNATISCHE UNTERSUCHUNGEN DES PILZ-PILZ-ANTAGONISMUS 45
3.5.1 CHITINASE-NACHWEIS NACH REISSIG 45
3.5.1.1 ENZYMNACHWEIS IM CHITINMEDIUM 45
3.5.1.2 ENZYMNACHWEIS IM ANTAGONISTENTEST 46
3.5.2 CHITINASE-NACHWEIS MIT 4-METHYLUINBELLIFERYL-N-ACETYLGLUCOSAMIN 46
3.5.2.1 SUBSTRAT-TESTPLATTEN ZUM NACHWEIS DER CHITINASE-AKTRVITAET 46
3.5.2.2 NACHWEIS DER CHITINASE-AKTRVITAET IM DUALEN ANTAGONISTENTEST : 47
3.6 ANTAGONISTENTEST MIT ERBSENKEIMLINGEN , 48
3.7 ERBSENKEIMUNGSTEST 51
3.7.1 PATHOGENITAET DER RHIZOCTONIA SO/A;-STAEMME... : 51
3.7.2 ERMITTLUNG DER ANTAGONISTISCHEN AKTIVITAET IN VIVO 51
ERGEBNISSE: SEKUNDAERSTOFFE AUS ANTAGONISTISCHEN UND MYCOPHILEN PILZEN
.... 53
SEKUNDAERSTOFFE AUS XYLARIA LONGIPES A19-91 53
.1 FERMENTATION VON-YY/ANA LONGIPES AI9-91 54
.2 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN AUS XYLARIA LONGIPES A19-91.. : 56
.3 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 58
.3.1 STRUKTURAUFKLAERUNG :....: :.. . 58
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.4 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER AUS XYLARIA LONGIPES A19-91
ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 67
4.1.4.1 XYLARIN UND XYLARIN-DERIVATE. 67
4.1.4.1.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM IM REIHENVERDUENNUNGSTEST 67
4.1.4.1.2 EINFLUSS VON XYLARIN AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN IN
HEFEZELLEN IN VIVO 69
4.1.4.1.3 VERGLEICH DER WIRKUNG VON XYLARIN MIT NIKKOMYCIN Z IM
AGARDIFFUSIONSTEST 70
4.1.4.1.4 BESTIMMUNG DER MIC VON XYLARIN UNTER ZUGABE VON D-SORBIT 70
4.1.4.1.5 ANTIFUNGJSCHE WIRKUNG VON XYLARIN IM AGARDIFFUSIONSTEST 71
4.1.4.1.6 CYTOTOXIZITAET 72
4.1.4.1.7 EINFLUSS VON XYLARIN AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN IN
HL60-ZELLEN IN VIVO 73
4.1.4.1.8 PHYTOTOXIZITAET 73
4.1.4.1.9 WEITERE BIOLOGISCHE AKTIVITAETEN 74
4.1.4.2 XYLARAMID, 2-HEXYLIDEN-3-METHYLBERNSTEINSAEURE,
2,5-BIS(HYDROXYMETHYL)- FURAN, TYROSOL 74
4.1.4.2.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM IM REIHENVERDUENNUNGSTEST 74
4.1.4.2.2 EINFLUSS VON XYLARAMID AUF DIE MAKROMOLEKULSYNTHESEN IN VIVO 75
4.1.4.2.3 BESTIMMUNG DER MIC VON XYLARAMID UNTER ZUGABE VON D-SORBIT 77
4.1.4.2.4 CYTOTOXIZITAET 77
4.1.4.2.5 PHYTOTOXIZITAET 78
4.1.4.2.6 WEITERE BIOLOGISCHE AKTIVITAETEN 78
4.1.4.3 2-HEXYLIDEN-3-METHYLBERNSTEINSAEURE-METHYLESTER,
2-(3,4-DIHYDROXYPHENYL)- ETHANOL, MARGOCETIN, 4-HYDROXYMELLEIN,
A19-91.B, A19-91.C UND A19-91.D.... 78 4.1.5 FERMENTATIONSANALYSEN 79
4.1.5.1 SEKUNDAERSTOFIBILDUNG VON A^/AR/A LONGIPES A19-91 IN HA-MEDIUM
UNTER VERSCHIEDENEN FERMENTATIONSBEDINGUNGEN 81
4.1.5.2 SEKUNDAERSTOFLBILDUNG VON XYLARIA LONGIPES A19-91 IN
VERSCHIEDENEN MEDIEN 83 4.1.6 DIE ANTAGONISTISCHE WIRKUNG VON XYLARIA
LONGIPES A19-91 GEGEN RHIZOCTONIA SOLANI 43-4 87
4.2 SEKUNDAERSTOFFBILDUNG VON VERTRETERN DER-FAMILIE DER XYLARIACEAE 88
4.2.1 XYLARIA OBOVATA A02-92 88
4.2.1.1 PRODUKTBILDUNG BEI XYLARIA OBOVATA A02-92 88
4.2.1.2 DIE ANTAGONISTISCHE WIRKUNG VON XYLARIA OBOVATA A02-92 GEGEN
RHIZOCTONIA SOLANI 43-4 89
4.2.2 HYPOXYLON SPEC. A37-92 90
4.2.3 VERSCHIEDENE J(Y/AR;A-STAEMME 90
4.2.3.1 STANDARDS 90
4.2.3.2 EXTRAKT-ANALYSEN VON VERSCHIEDENEN XYLARIA-STAEMMEN 93
4.3 SEKUNDAERSTOFFE AUS MYCOPHILEN PILZEN 96
4.3.1 SEKUNDAERSTOFFE AUS 185-94 96
4.3.1.1 FERMENTATION VON 185-94 97
4.3.1.2 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN AUS 185-94 99
4.3.2 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 1Q0
4.3.2.1 STRUKTURAUFKLAERUNG 100
4.3.2.2 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER AUS 185-94 ISOLIERTEN
VERBINDUNGEN 105 4.3.2.2.1 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION
105
4.3.2.2.2 CYTOTOXIZITAET : 106
4.3.2.2.3 PHYTOTOXISCHE WIRKUNG 107
4.3.2.2.4 NEMATIZIDE AKTIVITAET 108
4.3.2.2.5 HAEMOLYTISCHE WIRKUNG 108
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
4.3.2.2.6 WEITERE BIOLOGISCHE TESTSYSTEME 108
4.3.3 SEKUNDAERSTOFFE AUSPENICILLIUM SPEC. 171-93 109
4.3.3.1 FERMENTATION UND ISOLIERUNG DER SEKUNDAERSTOFFE 109
4.3.3.2 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER SEKUNDAERSTOFFE 110
4.3.3.3 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 110
4.3.3.4 SEKUNDAERSTOFFBILDUNG IM DUALEN ANTAGONISTENTEST VON PENICILLIUM
SPEC. 171-93 GEGEN RHIZOCTONIA SOLANI 43-4 111
4.3.4 2,5-DIMETHOXY-3,6-DUENETHYL-L,4-BENZOCHINON AUS SESQUICILLIUM
CANDELABRUM UR674 112
4.3.4.1 FERMENTATION, ISOLIERUNG UND STRUKTURAUFKLAERUNG 112
4.3.5 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 113
DISKUSSION 116
UNTERSUCHUNGEN ZUM PUEZ-PILZ-ANTAGONISMUS 117
1 TESTSYSTEME ZUR UNTERSUCHUNG ANTAGONISTISCHER PILZE 117
1.1 DER DUALE ANTAGONISTENTEST 117
1.1.1 ANTIBIOTIKA 118
1.1.2 ENZYME *. 119
1.2 ANTAGONISTENTEST MIT ERBSENKEIMLINGEN 123
1.3 DIE ANTAGONISTISCHE WIRKUNG IM IN V/VO-TESTSYSTEM. 123
5.1.2 SCREENING NACH POTENTIELLEN ANTAGONISTEN 124
5.1.3 DAS ANTAGONISTISCHE POTENTIAL VERSCHIEDENER PILZE 126
5.2 SEKUNDAERSTOFFE AUS ANTAGONISTISCHEN UND MYCOPHILEN PILZEN. 129
5.2.1 SEKUNDAERSTOFFE AUS PILZEN DER GATTUNG XYLARIA 129
5.2.1.1 XYLARIA LONGIPES A19-91 129
5.2.1.2 VERSCHIEDENE XYLARIA-STAEVAME UND HYPOXYLON SPEC. A37-92 133
5.2.1.3 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER AUS XYLARIA SPECIES ISOLIERTEN
VERBINDUNGEN 134
5.2.1.4 DIE BEDEUTUNG DER AUS XYLARIA LONGIPES AI 9-91 UND XYLARIA
OBOVATA A02-92 ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 138
5.2.2 SEKUNDAERSTOFFE AUS MYCOPHILEN PILZEN 139
5.3 SCHLUSSBETRACHTUNG 143
6 ZUSAMMENFASSUNG 144
7 LITERATURVERZEICHNIS 146
8 ANHANG 156
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Inhaltsverzeichnis
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Bibliotheksmagazin
| Signatur: |
0001 DA 97 728
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|---|---|
| Exemplar 1 | Ausleihbar Am Standort |