Verfügbarkeit: Beiträge zur Isolation von Nukleinsäuren während verschiedener Entwicklungsstadien der Arzneipflanze Digitalis lanata

Beiträge zur Isolation von Nukleinsäuren während verschiedener Entwicklungsstadien der Arzneipflanze Digitalis lanata:

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Beteilige Person:	Dumke-Lehmann, Ulrike (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	Deutsch
Veröffentlicht:	1993
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Beschreibung:	Halle-Wittenberg, Univ., Diss., 1994
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adam_text	IMAGE 1 - ISA- BEITRAEGE ZUR ISOLATION VON NUKLEINSAEUREN WAEHREND VERSCHIEDENER ENTWICKLUNGSSTADIEN DER ARZNEIPFLANZE DIGITALIS LANATA DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES DOCTOR RERUM NATURALIUM (DR. RER. NAT.) VORGELEGT DER MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER MART IN-LUTHER-UNI VERSI.TAET HALLE-WITTENBERG VON ULRIKE DUMKE-LEHMANN GEB. AM 1. MAI 1964 IN: BRANDENBURG GUTACHTER: 1 . J{ . K * H 2. D C- F S. 3. FTC?^. H. L HALLE (SAALE), AUGUST 1993 CF O^OIA. A6- L, 1 ( IMAGE 2 INHALTSVERZEICHNIS SEITE 1. EINLEITUNG 1 2. MATERIALIEN UND METHODEN 5 2.1. PFLANZENMATERIAL 5 2.2. NAEHRMEDIEN 6 2.3. BAKTERIENSTAEMME UND PLASMIDE 8 2.4. ISOLATION VON DNA AUS DIGITALIS LANATA ZELLKULTUREN UND TRANSFORMIERTEN GEWEBEN 9 2.4.1. ISOLATION VON DNA AUS ZELLKULTUREN (VER- GLEICHS-DNA) , 9 2.4.2. ISOLATION VON DNA AUS TRANSFORMIERTEN GE- WEBEN UND PFLANZEN 10 2.4.2.1. GEWINNUNG VON DNA NACH DELLAPORTA 10 2.4.2.2. DNA-ISOLATION NACH JUNGHANS UND METZLAFF 11 2.4.3. REINIGUNG VON DNA-PRAEPARATIONEN 12 2.4.3.1. CAESIUMCHLORID-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGA- TION . 12 2.4.3.2. REINIGUNG VON DNA UEBER QIAGEN-SAEULEN 12 2.4.4. EINSCHAETZUNG DER KONZENTRATION DER DNA- PRAEPARATIONEN 13 2.4.5. QUALITATIVE UNTERSUCHUNG DER DNA-PRAEPARA- TIONEN 14 2.4.5.1. DNA-RESTRIKTIONSENZYMANALYSE 14 2.4.5.2. AUFTRENNUNG UND PHOTOGRAPHISCHER NACHWEIS VON DNA IN AGAROSEGELEN 14 2.4.5.3. MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG VON DNA-MOLE- KUELEN 15 2.4.5.4. SOUTHERN-TECHNIK 16 2.5. DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG 18 2.5.1. ISOLATION DER NACHWEISSONDEN 18 2.5.1.1. ISOLATION VON PLASMID-DNA NACH BIRNBOIM UND DOLY * 18 2.5.1.2. EXTRAKTION VON PLASMID-DNA MIT HILFE VON QIAGEN-SAEULEN * 19 2.5.2. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA 20 2.5.?. FILTERHYBRIDISIERUNG 20 IMAGE 3 2.5.4. AUTORADIOGRAPHIE 21 2.6. ISOLATION VON RNA AUS DIGITALIS LANATA 22 2.6.1. ISOLATION VON GESAMT-RNA 22 2.6.1.1. ISOLATION VON GESAMT-RNA NACH REINBOTHE 22 2.6.1.2. EXTRAKTION VON GESAMT-RNA MIT GUANIDIN- THIOCYANAT - 23 2.6.1.3. ISOLATION VON GESAMT-RNA NACH DUNSMUIR 24 2.6.1.6. SPEKTROPHOTOMETRISCHE EINSCHAETZUNG DER EX- TRAKTIONSMETHODEN 26 2.6.2. ISOLATION VON MRNA 27 2.6.2.1. ISOLATION VON MRNA AUS GESAMT-RNA 27 2.6.2.2. EINSCHAETZUNG DER KONZENTRATION VON MRNA- PROBEN W 27 2.6.3. AUFTRENNUNG VON GESAMT- UND MRNA IN DENA- TURIERENDEN AGAROSEGELEN 28 2.6.4. NORTHERN-TRANSFER VON GESAMT- UND MRNA AUF NYLONMEMBRANEN 2 9 2.6.5. HYBRIDISIERUNG VON RNA-PROBEN MIT RADIOAK- TIV MARKIERTEN CDNA-KLONEN 29 2.6.6. RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER CDNA 29 2.7. BESTIMMUNG DER RNA-ABBAUENDEN ENZYMAKTIVI- TAET 30 3. ERGEBNISSE 32 3.1. ZUR GEWINNUNG VON NUKLEINSAEUREN EINGESETZ- TES PFLANZENMATERIAL 32 3.1.1. SOMATISCHE EMBRYONEN 32 3.1.2. SPROSSE UND KALLI 33 3.1.3. WURZELN 33 3.2. PRAEPARATION VON GESAMT- DNA AUS D. LANATA GEWEBEN UND ZEILSUSPENSIONSKULTUREN 34 3.3. DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG ZUM NACHWEIS DER QUALITAET DER DNA-PRAEPARATIONEN 38 3.3.1. NACHWEIS DES OCTOPINSYNTHASEGENS 39 3.3.2. NACHWEIS VON MARKER- UND REPORTERGENEN 40 3.3.3. NACHWEIS DER TRANSFORMATION VON D. ISAATA MIT A. RHIZOGENES WILDTYP STAEMMEN IN HAIRY -ROOT-KLONEN UND REGENERIERTEN PFLANZEN 43 IMAGE 4 3.4. ISOLATION VON GESAMT-RNA UND PRUEFUNG DER PRAEPARATIONEN AUF QUALITAET UND QUANTI- TAET * 47 3.5. ISOLATION VON MRNA 54 3.6. NACHWEIS DER REINHEIT DER MRNA-POPULATIO- NEN DURCH HYBRIDISIERUNGSEXPERIMENTE 56 4. DISKUSSION 57 4.1. PRAEPARATION VON GESAMT-DNA AUS VERSCHIE- DENEN ENTWICKLUNGSSTADIEN VON D. LANATA 57 4.2. ISOLATION VON GESAMT- UND MRNA 74 5. ZUSAMMENFASSUNG 83 6. LITERATURVERZEICHNIS 89
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