Untersuchung des inhibitorischen Effektes von GHRH-Antagonisten auf Hormonrezeptor-negative Mammakarzinomzelllinien in Kombination mit dem mTOR-Inhibitor Rapamycin in vitro:
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INHALTSVERZEICHNIS 3
1. EINLEITUNG 6
A. ALLGEMEINES (HORMONABHAENGIGKEIT DES MAMMAKARZINOMS) 6
B. ZIELGERICHTETE THERAPIEN 7
C. BEDEUTUNG VON GHRH UND GHRH-REZEPTOR 7
D. WIRKPRINZIP DER GHRH-ANTAGONISTEN 10
E. WIRKUNG VON GHRH-ANTAGONISTEN BEIM MAMMAKARZINOM 13
F. DIE ROLLE VON MTOR IM INTRAZELLULAEREN SIGNALWEG 14
G. WIRKSAMKEIT DES MTOR-INHIBITORS RAPAMYCIN 15
H. DIE IDEE EINER KOMBINATIONSBEHANDLUNG MIT GHRH-ANTAGONISTEN UND
EINEM MTOR-INHIBITOR 16
2. MATERIAL UND METHODEN 18
A. GHRH-ANTAGONISTEN 18
B. ZELLLINIEN 18
C. MATERIALIEN UND BEZUGSQUELLEN 19
D. METHODEN 23
I. ZELLKULTUR, GRUNDLAGEN 23
II. GEWINNUNG VON ZELLLYSATEN 24
III. PROTEINBESTIMMUNG MITTELS BCA-PROTEIN-ASSAY-KIT 24
IV. SDS-GELELEKTROPHORESE UND WESTERN BLOT, GRUNDLAGEN 25
V. WESTERN BLOT: REZEPTORNACHWEIS 27
VI. WESTERN BLOT: SIGNALMOLEKUELE 28
VII. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 30
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INHALTSVERZEICHNIS
VIII. DNA-FAERBUNG MIT PROPIDIUMIODID UND MESSUNG MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 32
IX. DYNAMISCHE ZELLZYKLUSMESSUNG MITTELS BRDU/HOECHST-QUENCHING 36
,X. IMMUNHISTOCHEMIE 39
XI. VITALITAETSANALYSE MITTELS XTT-ASSAY 40
3. ERGEBNISSE 42
A. REZEPTORBESTIMMUNG 42
I. OESTROGEN- UND PROGESTERONREZEPTOR 42
II. EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR (EGFR, HERL) 44
III. HER2/NEU (ERBB2)-REZEPTOR 45
IV. GHRH-REZEPTOR 45
V. ZUSAMMENFASSUNG DER REZEPTOREXPRESSION 47
B. NACHWEIS VON MTOR 47
C. DOSIS- UND ZEITABHAENGIGE WIRKUNG VON RAPAMYCIN 48
D. VITALITAETSANALYSE MITTELS XTT-ASSAY 50
E. EFFEKTE VON RAPAMYCIN UND JMR-132 BEI SK-BR-3, HCC1806 UND
HCC1937 51
F. EFFEKTE VON RAPAMYCIN UND MIA-313/MIA-606 BEI HCC1806 54
G. DYNAMISCHE ZELLZYKLUSMESSUNG MITTELS BRDU/HOECHST-QUENCHING 55
H. UNTERSUCHUNG DER AUSWIRKUNGEN AUF DIE INTRAZELLULAERE
SIGNALWEITERLEITUNG MITTELS WESTERN BLOT 57
I. EFFEKTE BEI MDA-MB-231 58
II. EFFEKTE BEI HCC1806 59
III. EFFEKTE BEI SK-BR-3 60
4. DISKUSSION 61
A. REZEPTORBESTIMMUNG 61
I. OESTROGEN-UND PROGESTERONREZEPTOR, HER2/NEU UND EGFR 61
4
INHALTSVERZEICHNIS
II. GHRH-REZEPTOR 62
B. NACHWEIS VON MTOR 62
C. * DOSIS- UND ZEITABHAENGIGE WIRKUNG VON RAPAMYCIN 62
D. VITALITAETSANALYSE MITTELS XTT-ASSAY 64
E. SYNERGISTISCHER EFFEKT VON RAPAMYCIN UND JMR-132 BEI SK-BR-3 64
F. DYNAMISCHE ZELLZYKLUSANALYSE: WIRKUNGSMECHANISMEN UND EFFEKT BEI
HCC1806 65
G. SIGNALWEGE 66
H. RESUEMEE 68
5. ZUSAMMENFASSUNG 70
6. LITERATURVERZEICHNIS 72
7. SONSTIGES 84
8. DANKSAGUNG 85
5
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