Wirkung und Wirkmechanismus von AEZS 126 auf verschiedene Subentitäten des Mammakarzinoms:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
ABKBRZUNGSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
1.1. BRUSTKREBS
1.1.1. INZIDENZ
1.1.2. MORTALITAET
1.1.3. PRAEVALENZ
1.1.4. RISIKOFAKTOREN
1.2. DAS TRIPLE-NEGATIVE MAMMAKARZINOM (TNBC)
1.2.1. ALLGEMEINES
1.2.2. THERAPIE DES TNBC
1.3. APOPTOSE, NEKROSE UND NEKROPTOSE
1.3.1. APOPTOSE
1.3.1.1. EXTRINSISCHER WEG (TODESREZEPTORWEG)
1.3.1.2. INTRINSISCHER WEG (MITOCHONDRALER WEG)
1.3.2. APOPTOSE UND AKT
1.3.3. NEKROPTOSE
1.4. PHOSPHATIDYLINOSITOL-3-KINASE/AKT-SIGNALWEG
1.4.1. ALLGEMEINES
1.4.2. PI3K.
1
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1.4.6. STOERUNGEN DES PI3K/AKT SIGNALWEGS 14
2. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. MATERIAL 17
2.1.1. VERWENDETE ZELLLINIEN 17
2.1.2. CHEMIKALIEN UND ENZYME 18
2.1.3. ANTIKOERPER 19
2.1.3.1. PRIMAERANTIKOERPER 19
2.1.3.1. SEKUNDARANTIKOERPER 22
2.1.4. MEDIEN UND PUFFER 23
2.1.4.1. ZELLKULTUIMEDIEN 23
2.2. METHODEN 28
2.2.1. KULTIVIERUNG 28
2.2.2. PASSAGIEREN ADHAERENTER ZELLEN 28
2.2.3. BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 29
2.2.4. WASCHEN DER ZELLEN 29
2.2.5. ZELLEN AUFLAUEN 29
2.2.6. ZELLEN EINFRIEREN 30
2.2.7. KRISTALLVIOLETT-ASSAY 30
2.2.8. ZVAD-FMK/NEKROSTATIN 30
2.2.9. HERSTELLUNG VON PROTEINLYSATEN 30
2.2.10. PROTEINBESTIMMUNG MITTELS BRADFORD-ASSAY 31
2.2.11. GELELEKTROPHORESE 32
II
2.2.12. UEBERTRAGUNG VON PROTEINEN AUS ELEKTROPHORESEGELEN AUF MEMBRANEN
(*SEMI-DRY BLOTTING ) 34
2.2.13. ANFAERBEN DER TRANSFERIERTEN PROTEINE 34
2.2.14. IMMUNDETEKTION DER TRANSFERIERTEN PROTEINE 35
2.2.15. LOSLOESEN VON AN DIE MEMBRAN GEBUNDENEN ANTIKOERPERN
(*STRIPPEN DER MEMBRAN) 36
2.2.16. FACS ( FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING ) 36
2.2.17. ZELLZYKLUS-FACS 37
2.2.18. ANNEXIN V/PROPIDIUMIODID FACS ZUR APOPTOSE DETEKTION 38
2.2.19. STATISTIK 40
3. ERGEBNISSE 41
3.1. AEZS 126 INHIBIERT DIE PHOSPHORYLIERUNG VON AKT IN VITRO 41
3.2. AEZS 126 REDUZIERT DIE VITALITAET DER BRUSTKREBS-ZELLLINIEN HCC1937,
HCC1806, MDA-MB468 UND MCF7 42
3.3. MECHANISTISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR ART DES ZELLTODES IN
BRUSTKREBS-ZELLLINIEN 45
3.3.1. EFFEKTE DER KOMBINATIONSBEHANDLUNG MIT AEZS 126 UND NECROSTATIN-1
BZW.
ZVAD-FMK AUF DIE VITALITAET DER HCC1937 ZELLEN 45
3.3.2. EFFEKTE DER KOMBINATIONSBEHANDLUNG MIT AEZS 126 UND NECROSTATIN-1
BZW.
ZVAD-FMK AUF DIE VITALITAET DER HCC1806 ZELLEN 48
3.3.3. EFFEKTE DER KOMBINATIONSBEHANDLUNG MIT AEZS 126 UND NECROSTATIN-1
BZW.
ZVAD-FINK AUF DIE VITALITAET DER MDA-MB468 ZELLEN 50
3.3.4. EFFEKTE DER KOMBINATIONSBEHANDLUNG MIT AEZS 126 UND NECROSTATIN-1
BZW.
ZVAD-FINK AUF DIE VITALITAET DER MCF7 ZELLEN 52
3.4. ZELLZYKLUS FACS 54
III
3.5. PROPIDIUMIODID/ANNEXINV FACS 58
3.5.1. HCC1937 59
3.5.2. HCC1806 60
3.5.3. MDA-MB468 60
3.5.4. MCF7 61
3.6. WESTERN BLOT 62
3.6.1. HCC1937 62
3.6.2. HCC1806 65
3.6.3. MDA-MB468 66
3.6.4. MCF7 68
4. DISKUSSION 71
4.1. VITALITAT 71
4.2. AKT/ERK INHIBITION 72
4.3. ZELLZYKLUS 74
4.4. PI/ANNEXINV FACS 75
4.5. RIP/PARP NECROSTATIN-1 /ZV
AD-FINK 76
4.6. CASPASE-3 WIRD IN HCC1937, HCC1806 UND MDA-MB468 NICHT GESPALTEN 81
4.7. PARP SPALTUNG IN MCF7 83
5. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 85
LITERATURVERZEICHNIS 89-96
IV
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