Der Effekt des Sertoli Zell-spezifischen Knockouts von Connexin43 auf die testikuläre Genexpression in der präpubertären Maus:
Gespeichert in:
| Beteilige Person: | |
|---|---|
| Format: | Hochschulschrift/Dissertation Buch |
| Sprache: | Deutsch |
| Veröffentlicht: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2012
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| Ausgabe: | 1.Aufl. |
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| Umfang: | XXIII, 186 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 9783835959095 |
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
V E R OE F F E N T L I C H U N G E N X
V E R Z E I C H N I S D E R A B K UE R Z U N G E N XI
A B B I L D U N G S V E R Z E I C H N I S X V I I
T A B E L L E N V E R Z E I C H N I S X X
E I N L E I T U N G U N D F R A G E S T E L L U N G X X I
1 L I T E R A T U R UE B E R S I C H T 1
1.1 HISTOLOGISCHER A U F B A U DES H O D E N S UND N O R M A L E S P E R
M A T O G E N E S E 1
1.1.1 A U F B A U D E S K E I M E P I T H E L S ( E P I T H E L I U M S
P E R M A T O G E N I C U M ) 1
1.1.1.1 D I E K Z U N D A B L A U F D E R K Z - R E I F U N G 1
1.1.1.1.1 Z E I T L I C H E S A U F T R E T E N D E R V E R S C H I E D
E N E N K Z - P O P U L A T I O N E N B E I D E R M A U S 3
1.1.1.1.2 S T A D I E N - U N D K Z - S P E Z I F I S C H E G E N E X P
R E S S I O N 3
1.1.1.1.3 R E G U L A T I O N D E R K Z - R E I F U N G 4
1.1.1.2 D I E S Z , I H R E F U N K T I O N E N U N D D I E B L U T - H
O D E N - S C H R A N K E 5
1.1.1.2.1 D I E S Z - D I F F E R E N Z I E R U N G 6
1.1.1.2.2 R E G U L A T I O N V O N P R O L I F E R A T I O N U N D D I
F F E R E N Z I E R U N G D E R S Z 7
1.1.1.2.3 D I F F E R E N Z I C R U N G S M A R K E R D E R S Z 8
1.1.1.2.4 M O R P H O L O G I S C H E V E R AE N D E R U N G E N D E R S
Z 9
1.1.2 D A S I N T E R S T I T I E L L E G E W E B E 10
1.2 STOERUNGEN D E R SPERMATOGENESE 10
1.2.1 H Y P O S P C R M A T O G C N E S E 11
I
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IMAGE 2
1.2.2 S P E R M A T O G E N E S E A R R C S T E 11
1.2.3 S C O - S Y N D R O M 12
1.3 ZELLVERBINDUNGEN UND B L U T - H O D E N - S C H R A N K E 12
1.3.1 G J 14
1.3.1.1 A U F B A U D C R G J 1 4
1.3.1.2 A U F B A U D E R C O N N E X O N C 15
1.3.1.3 C X - D I E P R O T E I N E D E R G J 16
1.3.1.3.1 N O M E N K L A T U R D E R C X 1 6
1.3.1.3.2 A U F B A U E I N E S C X 17
1.3.1.3.3 A U F B A U D E S C X - G E N S 18
1.3.1.3.4 C X 4 3 19
1.3.2 B I L D U N G V O N G J - K A N AE L E N 19
1.3.3 A B B A U V O N G J - K A N AE L E N 2 0
1.3.4 R E G U L A T I O N D E R G J I C 2 0
1.3.4.1 R E G U L A T I O N D E R C X - E X P R E S S I O N 2 1
1.3.4.1.1 T R A N S K R I P T I O N S K O N T R O L L C 2 1
1.3.4.1.2 E P I G C N E T I S C H E M E C H A N I S M E N 2 2
1.3.4.1.3 P O S T - T R A N S K R I P T I O N C L L E R E G U L A T I O
N 2 2
1.3.4.2 R E G U L A T I O N D E S OE F F N U N G S Z U S T A N D E S V O
N G J - K A N AE L E N 2 3
1.3.5 G J U N D C X I M H O D E N 2 3
II
IMAGE 3
1.3.5.1 G J U N D C X I M H O D E N M I T N O R M A L E R S P E R M A T
O G E N E S E 2 3
1.3.5.1.1 R AE U M L I C H E E X P R E S S I O N V O N G J U N D V E R S
C H I E D E N E N C X 2 4
1.3.5.1.2 Z E I T L I C H E E X P R E S S I O N V O N G J U N D C X 4 3
2 5
1.3.6 G J , C X U N D I H R E F U N K T I O N ( C N ) I M H O D E N 2 6
1.3.6.1 G J U N D C X I M H O D E N U N D S T OE R U N G E N D E R S P E
R M A T O G E N E S E 2 7
1.3.6.2 R E G U L A T I O N D E R G J 1 C U N D D E R C X - E X P R E S
S I O N I N D E N S Z 2 7
1.4 K O U N D K N O C K I N ( K L ) MODELLE 2 8
1.4.1 C X - K O U N D K L - M O D E L L E 2 9
1.4.1.1 A U S W I R K U N G E N V O N C X K O A U F D I E E M B R Y O N
A L C N T W I C K L U N G 2 9
1.4.2 C X K O - M AE U S C U N D S P E R M A T O G E N E S E 3 0
1.4.3 S Z - S P E Z I F I S C H C R K O V O N C X 4 3 ( S C C X 4 3 K O
) 3 1
2 M A T E R I A L U N D M E T H O D E N 3 3
2.1 MATERIAL/ G E W E B E 3 3
2.1.1 S C C X 4 3 K O - M AE U S E U N D W T - M AE U S E 3 3
2.1.1.1 G E W I N N U N G D E S S C H W A N Z B I O P T A T S 3 3
2 . 1 . 1 . 2 H O D E N G E W E B S E N T N A H M E U N D B E S T I M M
U N G D E S H O D E N G E W I C H T E S 3 3
2.2 M E T H O D E N 3 4
2.2.1 B E H A N D L U N G D E R M AE U S E S C H W A N Z B I O P S I E N
U N D D N A - E X T R A K T I O N 3 4
2 . 2 . 2 G E N O T Y P I S I E R U N G D E R G E N U T Z T E N M AE U S
E 3 5
2.2.2.1 P C R Z U R D E T E K T I O N D E R C R E - R E K O M B I N A S
E C R E P C R 3 5
2 . 2 . 2 . 2 P C R Z U R D E T E K T I O N D E R L O X P - E L E M E N
T E F L O X - P C R 3 6
I I I
IMAGE 4
2 . 2 . 2 . 3 G E L E L E K T R O P H O R E S C D E R C R E - U N D F L
O X - P C R - P R O D U K T C 3 7
2.2.2.3.1 E R S T E L L E N E I N E S A G A R O S E - G E L S 3 8
2 . 2 . 2 . 3 . 2 V O R B E R E I T U N G D E R P C R - P R O D U K T E
U N D D E S M A R K E R S 3 8
2 . 2 . 2 . 3 . 3 A U F T R E N N U N G D E R P C R - P R O D U K T E U
N D D O K U M E N T A T I O N 3 9
2 . 2 . 3 G E F R O R E N E S G E W E B E 3 9
2 . 2 . 4 P A R A F F I N - E I N G E B E T T E T E S G E W E B E 3 9
2.2.4.1 F I X A T I O N I N B O U I N S C H E R L OE S U N G 4 0
2 . 2 . 4 . 2 F I X A T I O N I N F O R M A L I N 4 0
2 . 2 . 4 . 3 E I N B E T T U N G D E R P R O B E N IN P A R A F F I N 4
0
2 . 2 . 4 . 4 A P E S - B E S C H I C H T U N G D E R O B J E K T T R AE
G E R ( O T ) 4 1
2 . 2 . 4 . 5 H E R S T E L L U N G H I S T O L O G I S C H E R S C H N
I T T E 4 2
2 . 2 . 4 . 6 H E - F AE R B U N G 4 2
2 . 2 . 4 . 7 L I C H T M I K R O S K O P I E U N D Q U A N T I T A T I
V E B E S T I M M U N G D E R S Z - U N D K Z - Z A H L J E
T U B U L U S 4 3
2 . 2 . 4 . 8 S T A T I S T I S C H E A U S W E R T U N G D E R E R H O
B E N E N D A T E N ( Z E L L Z A H L E N ) 4 3
2 . 2 . 5 A L L G E M E I N E V O R B E M E R K U N G Z U R I H C 4 4
2 . 2 . 6 SS - G A L A K T O S I D A S E - I H C 4 5
2 . 2 . 7 E X T R A K T I O N U N D I S O L A T I O N V O N R N A A U S
G C F R I C R M A T E R I A L 4 9
2.2.7.1 S T A B I L I S I E R U N G D E R R N A 4 9
2 . 2 . 7 . 2 E X T R A K T I O N D E R R N A 4 9
2.2.7.2.1 E X T R A K T I O N 5 1
2 . 2 . 7 . 2 . 2 M E S S U N G D E S R N A - G C H A L T E S U N D K O
N T R O L L E D E R R N A - Q U A L I T AE T 5 2
I V
IMAGE 5
2 . 2 . 8 M I C R O A R R A Y 5 3
2.2.8.1 A L L G E M E I N E V O R B E M E R K U N G E N Z U R M I E R O
A R R A Y - A N A L Y S E 5 3
2 . 2 . 8 . 2 V E R W E N D E T E P R O B E N 5 3
2 . 2 . 8 . 3 H E R S T E L L U N G V O N M A R K I E R T E R C R N A 5
3
2 . 2 . 8 . 4 F R A G M E N T I E R U N G D E R C R N A U N D H Y B R I
D I S I E R U N G A U F D E M A R R A Y 5 5
2 . 2 . 8 . 5 W A S C H U N G E N U N D F AE R B U N G M I T F L U O R O
P H O R E N 5 5
2 . 2 . 8 . 6 S C A N D E S I F - S I G N A L , H I N T E R G R U N D K
O R R C K T U R U N D I N T R A - A R R A Y N O R M A L I S I E R U N G
. . . 5 5
2 . 2 . 8 . 7 W E I T E R E A U S W E R T U N G U N D Q U A L I T AE T S
K O N T R O L L E D E R D A T E N 5 6
2.2.8.7.1 S T A T I S T I S C H E A U S W E R T U N G D E R D A T E N 5
7
2 . 2 . 8 . 7 . 2 F U N K T I O N E L L E A U S W E R T U N G D E R D A
T E N 5 8
2 . 2 . 8 . 7 . 3 C L U S T C R A N A L Y S E 5 8
2 . 2 . 8 . 7 . 4 P A T H W A Y - A N A L Y S E D E R D A T E N 5 9
2 . 2 . 9 R T - P C R S. 6 1
2.2.9.1 UE B E R P R UE F U N G D E R R T - P C R U N D D E S D N A S C V
E R D A U S 6 2
2 . 2 . 9 . 2 A U F R E I N I G U N G D E R C D N A 6 4
2 . 2 . 1 0 Q R T - P C R 6 5
2 . 2 . 1 0 . 1 A U S W A H L D E R P R I M E R P A A R E F UE R D I E Q
R T - P C R 6 5
2 . 2 . 1 0 . 2 E R S T E L L U N G D E R C D N A - V E R D UE N N U N G
S R E I H E 6 5
2 . 2 . 1 0 . 3 V E R G L E I C H D E R G E N E X P R E S S I O N I N D
E R Q R T - P C R 6 7
2 . 2 . 1 0 . 4 S E Q U E N Z I E R U N G D E R P C R - P R O D U K T E
6 9
2 . 2 . 1 0 . 5 S T A T I S T I S C H E A U S W E R T U N G D E R Q R T
- P C R - D A T E N 7 0
2.2.11 B E S T I M M U N G D E R K O R R E L A T I O N Z W I S C H E N M
I C R O A R R A Y - D A T C N U N D Q R T - P C R -
E R G E B N I S S E N 7 1
V
IMAGE 6
2 . 2 . 1 2 I H C Z U R B E S T AE T I G U N G D E R E R G E B N I S S E
D E R M I C R O A R R A Y - A N A L Y S E U N D Q R T - P C R 7 2
2.2.12.1 C X 4 3 - I H C 7 2
2 . 2 . 1 2 . 2 O C C L U D I N - I H C 7 4
2 . 2 . 1 2 . 3 A M H - I H C 7 5
2 . 2 . 1 2 . 4 S T R A 8 - I H C 7 5
2 . 2 . 1 2 . 5 D A Z L - I H C 7 6
2 . 2 . 1 2 . 6 L I C H T M I K R O S K O P I E U N D A U S W E R T U N
G D E R I M M U N R E A K T I O N 7 8
2 . 2 . 1 3 IF 7 8
2 . 2 . 1 3 . 1 A L L G E M E I N E V O R B E M E R K U N G E N Z U R I
F 7 8
2 . 2 . 1 3 . 2 IF V O N D M R T 7 7 8
2 . 2 . 1 3 . 3 D E T E K T I O N D E S I F - S I G N A L S U N D A U S
W E R T U N G D E R I M M U N R E A K T I O N 8 0
3 E R G E B N I S S E 81
3.1 GENOTYPISIERUNGEN 81
3.1.1 P C R 81
I
3.1.1.1 C R E P C R 8 1
3 . 1 . 1 . 2 F L O X - P C R 8 3
3.2 B E S T I M M U N G DES RELATIVEN HODENGEWICHTES 8 4
3.3 EVALUATION VON H E GEFAERBTEN SCHNITTEN 8 4
3.3.1 W T - M AE U S E 8 5
3 . 3 . 2 S C C X 4 3 K O - M AE U S E 8 6
3.4 M O R P H O M E T R I S C H E B E S T I M M U N G D E R S Z - U N D
K Z - Z A H L 8 6
3.5 SS-GALAKTOSIDASE-IHC 8 7
V I
IMAGE 7
3.5.1 W T - M AE U S C 8 8
3 . 5 . 2 S C C X 4 3 K O - M AE U S C 8 9
3 . 6 MICROARRAY-ANALYSE 9 0
3.6.1 S I G N I F I K A N T R E G U L I E R T E G E N E 9 0
3 . 6 . 2 G O - A N A L Y S E 9 1
3 . 6 . 3 K Z - S P E Z I F I S C H E G E N E 9 3
3 . 6 . 4 P A T H W A Y - A N A L Y S E 9 4
3.6.4.1 F U N K T I O N E L L E A N A L Y S E D E S G E S A M T E N D A
T E N S A T Z E S 9 4
3 . 6 . 4 . 2 N E T W O R K - B I L D U N G 9 4
3 . 6 . 4 . 3 K O R R E L A T I O N Z W I S C H E N D E N S I G N I F I
K A N T R E G U L I E R T E N G E N E N U N D C X 4 3 9 7
3 . 6 . 4 . 4 S E L F - M A D E P A T H W A Y S 9 8
3 . 6 . 4 . 5 C A N O N I C A L P A T H W A Y S 9 8
3.7 R T - P C R 100
3.8 Q R T - P C R 101
3.8.1 C D N A - V E R D UE N N U N G S R E I H E 1 0 2
I
3.8.1.1 E R G E B N I S D E R Q R T - P C R 1 0 4
3 . 8 . 2 K O R R E L A T I O N F C M I C R O A R R A Y - A N A L Y S E
U N D F C Q R T - P C R 1 0 5
3 . 9 I H C - F AE R B U N G E N AUSGEWAEHLTER G E N E 105
3.9.1 C X 4 3 - I H C 105
3.9.1.1 W T - M AE U S E 1 0 6
3 . 9 . 1 . 2 S C C X 4 3 K O - M AE U S C 1 0 7
V I I
IMAGE 8
3 . 9 . 2 O C C L U D I N - I H C 1 0 8
3.9.2.1 W T - M AE U S E 1 0 8
3 . 9 . 2 . 2 SCC .X43KO-, MAEUSE 109
3 . 9 . 3 A M H - I H C 110
3.9.3.1 W T - M AE U S E 1 1 0
3 . 9 . 3 . 2 S C C X 4 3 K . O - M AE U S C 111
3 . 9 . 4 S T R A 8 - I H C 111
3.9.4.1 W T - M AE U S E 1 1 2
3 . 9 . 4 . 2 S C C 4 3 K O - M AE U S C 1 1 3
3 . 9 . 5 D A Z L - I H C 1 1 3
3.9.5.1 W T - M AE U S E 1 1 4
3 . 9 . 5 . 2 S C C X 4 3 K O - M AE U S E 115
3.10 IF VON D M R T 7 116
3.10.1.1 W T - M AE U S E 1 1 6
3 . 1 0 . 1 . 2 S C C X 4 3 K . O - M AE U S E 117
4 D I S K U S S I O N 118
4.1 EINFLUSS D E R CX43-DELETION IN S Z A U F DIE Z E L L Z U S A M M E
N S E T Z U N G U N D
HODENMORPHOLOGIE 118
4.1.1 E I N F L U S S D E R C X 4 3 - D E L E T I O N A U F D I E S Z -
Z A H L 1 1 8
4.2 EINFLUSS D E R CX43-DELETION A U F DIE K Z - Z A H L 119
4.3 V O N D E R CX43-DELETION BETROFFENE G E N E 120
4.4 FUNKTIONSKATEGORIEN D E R SIGNIFIKANT REGULIERTEN G E N E 120
V L L L
IMAGE 9
4.5 KZ-SPEZIFISCHE G E N E D E R S P E R M A T O G E N E S E 121
4.6 PATHWAY-ANALYSE DER SIGNIFIKANT REGULIERTEN G E N E 124
4.7 NETZWERK-ANALYSE D E R SIGNIFIKANT REGULIERTEN G E N E 125
4.8 CANONICAL PATHWAY-ANALYSE DER SIGNIFIKANT REGULIERTEN G E N E 126
4.9 C X 4 3 UND DIE B L U T - H O D E N - S C H R A N K E 127
4.10 RETINSAEURE U N D C X 4 3 127
4.11 C X 4 3 UND DAZL 129
4.12 DIE D M - G E N F A M I L I E U N D C X 4 3 130
4.13 WEITERE SIGNIFIKANT REGULIERTE G E N E UND C X 4 3 130
5 Z U S A M M E N F A S S U N G 133
6 S U M M A R Y 135
7 L I T E R A T U R V E R Z E I C H N I S 137
8 B E Z U G S Q U E L L E N 153
8.1 STOFFE UND REAGENZIEN 153
8.2 SONSTIGES MATERIAL 157
8.3 GERAETE 158
8.4 SOFTWARE 160
9 L I S T E D E R S I G N I F I K A N T V E R AE N D E R T E N G E N E
161
E R K L AE R U N G V- 184
D A N K S A G U N G 185
I X
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