Verfügbarkeit: Die Rolle von Isl1 und Nkx2.5 im transkriptionellen Netzwerk der kardialen Progenitorzelle

Die Rolle von Isl1 und Nkx2.5 im transkriptionellen Netzwerk der kardialen Progenitorzelle:

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Bibliographische Detailangaben
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adam_text	IMAGE 1 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 9 1.1. HERZENTWICKLUNG IM EMBRYO BEI SAEUGETIEREN 9 1.2. VORLAEUFERPOPULATIONEN 12 1.3. ENTWICKLUNGSPOTENTIAL MULTIPOTENTER ISL1 + KARDIALER VORLAEUFERZELLEN 17 1.4. TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN DER EMBRYONALENTWICKLUNG 20 2. FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG 26 3. MATERIAL 30 3.1. CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 30 3.2. MEDIUM UND ZUSAETZE FUER BAKTERIEN- UND ZELLKULTUR 32 3.3. PUFFER UND LOESUNGEN 33 3.4. ENZYME 36 3.5. BAKTERIENSTAEMME 36 3.6. ZELLLINIEN 37 3.7. ANTIKOERPER 37 3.8. MOLEKULARBIOLOGISCHE KITSYSTEME 37 3.9. MOLEKULARGEWICHTSMARKER 38 3.10. PRIMER 38 3.11. VEKTOREN 39 3.12. GERAETE 40 3.13. SOFTWARE 41 3.14. VERBRAUCHSMATERIALIEN 42 4. METHODEN 43 4.1. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 43 4.1.1. RESTRIKTIONSVERDAU 43 4.1.2. DEPHOSPHORYLIERUNG 43 4.1.3. UEBERHAENGENDE DNA-FRAGMENTE ENTFERNEN 43 4.1.4. LIGATIONEN 43 4.1.5. DNA-ELEKTROPHORESE 44 5 HTTP://D-NB.INFO/1032617500 IMAGE 2 INHALTSVERZEICHNIS 4.1.6. AUFREINIGUNG UND KONZENTRATION VON DNA 44 4.1.7. BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION 44 4.1.8. DNA-SEQUENZIERUNG.. 45 4.1.9. POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 45 4.1.10. HERSTELLUNG VON DOPPELSTRAENGIGEN OLIGONUKLEOTIDEN 45 4.1.11. QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 46 4.1.12. ISOLIERUNG VON RNA AUS ZELLEN 46 4.1.13. REVERSE TRANSKRIPTION VON RNA ZU CDNA 47 4.1.14. HERSTELLUNG VON NUKLEAEREN EXTRAKTEN 47 4.1.15. LUCIFERASE-ASSAY 47 4.1.16. SS-GALAKTOSIDASE-ASSAY 48 4.1.17. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 48 4.1.18. BINDUNGS-ASSAY 49 4.1.19. IMMUNPRAEZIPITATION 49 4.1.20. SDS-ELEKTROPHORESE 50 4.1.21. ELECTROMOBILITY-SHIFT-ASSAY (EMSA) 50 4.1.22. WESTERN BLOT 51 4.2. KLONIERUNG DER VEKTOREN 52 4.2.1. KLONIERUNG DES VEKTORS PGEX-NKX2.5 52 4.2.2. KLONIERUNG DES VEKTORS PET101-LSL1 52 4.2.3. KLONIERUNG DES VEKTORS PSIN NKX-HA IRES GFP 53 4.2.4. KLONIERUNG DER PGL4.24 LUCIFERASE VEKTOREN 53 4.3. BAKTERIENKULTUR 54 4.3.1. TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN 54 4.3.2. VERMEHRUNG VON PLASMIDEN 54 4.3.3. EXPRESSION VON GST-TAG-NKX2.5 IN ESCHERICHIA COLI 54 4.3.4. AUFREINIGUNG VON GST-TAG PROTEINEN 54 4.3.5. EXPRESSION VON HIS-TAG-LSL1 IN ESCHERICHIA COLI 55 4.3.6. AUFREINIGUNG VON HIS-TAG PROTEINEN 55 6 IMAGE 3 INHALTSVERZEICHNIS 4.4. EUKARYOTE ZELLKULTUR 56 4.4.1. KULTURBEDINGUNGEN 56 4.4.2. PASSAGIEREN DER ZELLEN 56 4.4.3. EINFRIEREN DER ZELLEN 56 4.4.4. AUFTAUEN DER ZELLEN 57 4.4.5. PRAEPARATION DER FEEDERZELLEN 57 4.4.6. TRANSFEKTION VON ZELLEN 57 4.4.7. HERSTELLUNG VON POLY-HEMA BESCHICHTETEN PLATTEN 58 4.4.8. DIFFERENZIERUNG VON ES-ZELLEN IM EMBRYOID BODY (EB) SYSTEM 58 4.4.9. HERSTELLUNG VON LENTIVIREN 58 4.4.10. INFEKTION VON EMBRYONALEN STAMMZELLEN MIT LENTIVIREN 59 4.4.11. FLUORESZENZ-AKTIVIERTE-ZELLSORTIERUNG (FACS) 59 4.4.12. IMMUNFLUORESZENZ 60 5. ERGEBNISSE 61 5.1. INTERAKTION VON NKX2.5 UND ISL1 61 5.1.1. CO-IMMUNPRAEZIPITATION IM HETEROLOGEN SYSTEM 61 5.1.2. IN VITRO EXPRESSION, AUFREINIGUNG UND INTERAKTION 62 5.1.3. DOMAIN-MAPPING MIT TRUNKIERTEN NKX2.5 MUTANTEN 63 5.1.4. HERSTELLUNG EINER NKX2.5-HA UEBEREXPRIMIERENDEN ES-ZELLLINIE 64 5.1.5. CO-IMMUNPRAEZIPITATION IN ES-ZELLEN DER MAUS 67 5.2. GEMEINSAME REGULATION VON GENEN DER KARDIALEN ENTWICKLUNG 68 5.3. DIREKTES ABSCHALTEN DER ISL1-EXPRESSION DURCH NKX2.5 70 6. DISKUSSION 75 6.1. INTERAKTION VON NKX2.5 MIT ISL1 75 6.2. GEMEINSAME REGULATION VON GENEN DER KARDIALEN ENTWICKLUNG 76 6.3. DIREKTES ABSCHALTEN DER ISL1-EXPRESSION DURCH NKX2.5 78 6.4. AUSBLICK 80 7. LITERATURVERZEICHNIS 81 8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 87 7 IMAGE 4 INHALTSVERZEICHNIS 9. ZUSAMMENFASSUNG 89 10. SUMMARY 90 IM RAHMEN DER DISSERTATION ENTSTANDENE PUBLIKATIONEN 91 LEBENSLAUF 92 DANKSAGUNG 93 8
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