Analyse des Zusammenhangs zwischen struktureller T-Zell-Avidität und Immunodominanz:
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2012
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3
1 INHALTSVERZEICHNIS
1 INHALTSVERZEICHNIS 3
2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 6
3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 7
4 EINLEITUNG 8
4.1 IMMUNODOMINANZ 8
4.1.1 DEFINITION 8
4.1.2 EINFLUESSE DURCH ANTIGEN-PROZESSIERUNG UND -PRAESENTATION 8
4.1.2.1 DAS IMMUNOPROTEASOM - EIN SPEZIALIST 9
4.1.2.2 TAP TRANSPORTIERT SELEKTIV PEPTIDE AUS DEM ZYTOSOL IN DAS ER 10
4.1.2.3 MHC I UND SEINE PRAEFERENZEN 11
4.1.2.4 KREUZPRAESENTATION 13
4.1.3 T-ZELL ABHAENGIGE FAKTOREN 14
4.1.3.1 T-ZELL-REZEPTOR-REPERTOIRE 16
4.1.3.2 VORLAEUFERFREQUENZEN 17
4.1.3.3 T-ZELL-REZEPTOR-AVIDITAET 18
4.1.3.3.1 AVIDITAET UND IHRE EINFLUSSGROESSEN 18
4.1.3.3.2 VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG DER STRUKTURELLEN AVIDITAET 19
4.1.3.3.3 STRUKTURELLE AVIDITAET UND IMMUNODOMINANZ 20
4.2 DAS INFEKTIONSMODELL DER MURINEN LISTERIOSE 21
4.3 ZIEL DIESER DOKTORARBEIT 22
5 MATERIAL UND METHODEN 23
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IMAGE 2
4
5.1 MATERIALIEN 23
5.1.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 23
5.1.2 PUFFER UND MEDIEN 24
5.1.3 PEPTIDE 25
5.1.4 ANTIKOERPER 25
5.1.5 MHC-STREPTAMERE 25
5.1.6 MAEUSE 26
5.1.7 MIKROSKOP UND AUSSTATTUNG FUER DIE TCR AVIDITAETSMESSUNG 26
5.1.8 AUSSTATTUNG 26
5.1.9 SOFTWARE 27
5.2 METHODEN 27
5.2.1 INFEKTION VON MAEUSEN MIT LISTERIA MONOCYTOGENES 27
5.2.2 ORGANENTNAHME UND MILZPRAEPARATION 28
5.2.3 NEGATIVE ANREICHERUNG MIT ANTI-CD4 UND ANTI-CD 19 BELADENEN BEADS
28
5.2.4 T-ZELL-FAERBUNG 29
5.2.5 ZELLSORTIERUNG 29
5.2.6 MESSUNG DER DISSOZIATIONSGESCHWINDIGKEIT DES PEPTID-MHC-KOMPLEXES
VOM T-ZELLREZEPTOR 30
5.2.6.1 PRAKTISCHE UMSETZUNG 30
5.2.6.2 DATENANALYSE 30
6 ERGEBNISSE 32
6.1 EINE NEUE METHODE ZUR BESTIMMUNG DER DISSOZIATIONSGESCHWINDIGKEIT
DES PEPTID-MHCKOMPLEXES VOM GEBUNDENEN T-ZELL-REZEPTOR 32
6.1.1 PRINZIP 32
6.1.2 ENTWICKLUNG EINES ALGORITHMUS ZUR DATENANALYSE 34
6.1.3 MINIMIERUNG DER NOTWENDIGEN AUSGANGSZELLZAHL 37
6.1.4 REPRODUZIERBARE ERGEBNISSE DURCH VERSCHIEDENE WISSENSCHAFTLER 38
IMAGE 3
5
6.2 LL09I -99 -SPEZIFISCHE T-ZELLEN ZEIGEN IM SEKUNDAEREN
EFFEKTORREPERTOIRE HOEHERE
DISSOZIATIONSHALBWERTSZEITEN T N ALS IM PRIMAEREN EFFEKTORREPERTOIRE 39
6.3. FUNKTIONELLE AVIDITAET UND IMMUNODOMINANZ 41
6.4 T-ZELLEN, DIE DAS IMMUNODOMINANTE EPITOP LLO91 .99 ERKENNEN, ZEIGEN
IM SEKUNDAEREN
EFFEKTORREPERTOIRE HOEHERE DISSOZIATIONSHALBWERTSZEITEN ALS T-ZELLEN, DIE
DIE SUBDOMINANTEN
EPITOPE P6O217-225 ODER P60467^G4 ERKENNEN 43
7 DISKUSSION 47
7.1 OPTIMIERUNG EINER NEUEN METHODE ZUR BESTIMMUNG DER
DISSOZIATIONSGESCHWINDIGKEIT DES
PEPTID-MHC-KOMPLEXES VOM GEBUNDENEN T-ZELL-REZEPTOR 47
7.2 FUNKTIONELLE UND STRUKTURELLE AVIDITAET 50
7.3 STRUKTURELLE AVIDITAET ALS EIN EINFLUSSFAKTOR AUF DIE IMMUNODOMINANZ
52
7.3.1 STRUKTURELLE AVIDITAET ALS SELEKTIONSVORTEIL 52
7.3.2 KORRELATION ZWISCHEN STRUKTURELLER AVIDITAET UND IMMUNODOMINANZ 53
8 ZUSAMMENFASSUNG 56
9 REFERENZEN 58
10 DANKSAGUNG 68
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0001 DM 30287
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