Availability: Heteromultimerisierung und Stöchiometrie heterotrimerer P2X-Rezeptoren

Heteromultimerisierung und Stöchiometrie heterotrimerer P2X-Rezeptoren:

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Main Author:	Römer, Thomas 1978- (Author)
Format:	Thesis/Dissertation Book
Language:	German
Published:	Göttingen Cuvillier 2009
Edition:	1. Aufl.
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adam_text	INHALT I 1 EINLEITUNG 1 1.1 LIGANDEN-GESTEUERTE LONENKANAELE 1 1.2 PURINERGE REZEPTOREN 3 1.3 P2X-REZEPTOREN 3 1.3.1 ATP ALS ENDOGENER UEGAND FUER P2X-REZEPTOREN 3 1.3.2 STRUKTUR DER P2X-REZEPTOREN 4 1.3.3 LOKALISATION UND PHYSIOLOGISCHE FUNKTION DER P2X-REZEPTOREN 8 1.3.4 ASSEMBLIERUNG HETEROMERER P2X-REZEPTOREN 10 1.4 PHARMAKOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN VON P2X-REZEPTOREN 13 1.4.1 AGONISTEN 14 1.4.2 ANTAGONISTEN 14 1.4.3 REGULATION 15 1.5 ASSEMBLIERUNG VON MEMBRANPROTEINEN 17 1.5.1 N-GLYKOSYLIERUNG VON MEMBRANPROTEINEN 19 1.5.2 ASSEMBLIERUNG UND BILDUNG VON DISULFIDBRUECKEN VON MEMBRANPROTEINEN 20 1.6 HETEROLOGE EXPRESSIONSSYSTEME FUER LGICS 21 1.6.1 ESCHERICHIA CO/I ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYTEM FUER LGICS 21 1.6.2 PICHIA PASTONS ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYSTEM FUER LGICS 22 1.6.3 XENOPUS /AEV/S-OOZYTEN ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYSTEM FUER LGIC 23 2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 25 3 MATERIAL UND METHODEN 28 3.1 MATERIAL 28 3.1.1 CHEMIKALIEN 28 3.1.2 OLIGONUKLEOTIDE 28 3.1.3 ENZYME 28 3.1.4 WASSER 28 3.2 MOTEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 28 3.2.1 STERILTECHNIK 28 3.2.2 EIGENSCHAFTEN DER VERWENDETEN VEKTOREN 29 3.2. BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/992645190 DIGITALISIERT DURCH INHALT 3.2.8 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON SAEUGERZELLEN MIT LIPOFECTAMIN 32 3.2.9 FIXIERUNG DER ZELLEN 32 3.2.10 DNA-SEQUENZIERUNG 33 3.2.11 KLONIERTE CDNA-KONSTRUKTE 33 3.3 CRNA-SYNTHESE 33 3.4 X./AEWS-OOZYTEN ALS EXPRESSIONSSYSTEM 34 3.4.1 HERKUNFT UND HALTUNG DER FROESCHE 34 3.4.2 OVARENTNAHME 34 3.4.3 KOLLAGENASE BEHANDLUNG DER X./AEV/S-OOZYTEN 35 3.4.4 CRNA-MIKROINJEKTION IN X/AEV/S-OOZYTEN 35 3.5 P.PASTORIS ALS EXPRESSIONSSYSTEM 35 3.5.1 TRANSFORMATION VON P.PASTORIS DURCH ELEKTROPORATION 35 3.5.2 SELEKTION VON P.PASTORIS-KLONEN MIT MEHRFACHEN VEKTORINSERTIONEN 36 3.5.3 HETEROLOGE EXPRESSION IN P.PASTORIS 36 3.6 PROTEINCHEMISCHE METHODEN 37 3.6.1 ISOLIERUNG DER P.PASTORIS-ZELLMEMBRAN 37 3.6.2 METABOLISCHE MARKIERUNG MITTELS L-[ 35 S]-METHIONIN IN X./AEWS-OOZYTEN 37 3.6.3 METALL-CHELAT AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 38 3.6.4 STREP-TACTIN AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 40 3.6.5 ENZYMATISCHE DEGLYKOSYLIERUNG 40 3.6.6 MARKIERUNG VON PROTEINEN DURCH 25 I-SULFO-SHPP 41 3.6.7 OBERFLAECHENMARKIERUNG DURCH CY5-MONO-NHS-ESTER 42 3.6.8 CHEMISCHES CROSSLINKEN MIT DTSSP, DMS UND BS 3 42 3.6.9 LIMITIERTE TRYPSINOLYSE 43 3. INHALT III 3.9 ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME AN X./AEWS-OOZYTEN 51 4 ERGEBNISSE 52 4.1 HETEROLOGE EXPRESSION IN PICHIA PASTORIS 52 4.1.1 KLONIERUNG UND EXPRESSION DER RP2X,-UNTEREINHEIT IN P.PASTORIS 52 4.1.2 SOLUBILISIERUNG VON HIS-RP2XRPROTEIN AUSP. PASTORIS 55 4.1.3 UNTERSUCHUNG DER GLYKOSYLIERUNG VON HIS-RP2X,-UNTEREINHEITEN AUS P.PASTORIS 58 4.1.4 ANALYSE DES QUARTAERZUSTANDES VON HIS-RP2X,-PROTEIN AUS P.PASTORIS 59 4.1.5 ANALYSE DES QUARTAERZUSTANDES DES AUS P.PASTORIS-ISOLIERTEN HIS-RP2X 1 -PROTEINS DURCH CHEMISCHES CROSSLINKING 64 4.1.6 ANALYSE DER RP2XI-PROTEINFALTUNG DURCH LIMITIERTE TRYPSINOLYSE 65 4.2 FLUORESZENZMARKIERUNG VON OBERFLAECHENPROTEINE ZUR UNTERSUCHUNG VON P2X-REZEPTOREN 67 4.2.1 MARKIERUNG VON BSA MIT FLUORESZENZFARBSTOFFEN 67 4.2.2 FLUORESZENZMARKIERUNG VON HIS-RP2X,-REZEPTOREN AN DER ZELLOBERFLAECHE VON X.LAEVIS- OOZYTEN 69 4.2.3 UNTERSUCHUNG DES GLYKOSYLIERUNGSZUSTANDES VON PLASMAMEMBRAN-STAENDIGEN HIS-RP2X,- REZEPTOREN 70 4.2.4 ANALYSE DES QUARTAERZUSTANDES VON FLUORESZENZMARKIERTEM BSA MITTELS CN-PAGE UND PFO- PAGE 73 4.2.5 UNTERSUCHUNG DES QUARTAERZUSTANDES VON HIS-RP2X 1 - IV INHALT 4.4 UNTERSUCHUNG DES P2X 1 -HETEROMERS 105 4.4.1 HETEROASSEMBLIERUNG VON HIS-RP2X 1 -STREPLL UND HIS-RP2X,J-UNTEREINHEITEN 105 4.4.2 GLYKOSYLIERUNGSZUSTAND DER HIS-RP2X6-UNTEREINHEIT IM RP2X 1 -REZEPTORKOMPLEX 107 4.4.3 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON P2X 1RT -REZEPTOREN 108 4.5 UNTERSUCHUNG DER REZEPTORSTOICHIOMETRIE VON RP2X 1 HETEROMEREN 110 4.5.1 HETEROASSEMBLIERUNG VON RP2XU 2 KOMPLEXEN 110 4.5.2 FLUORESZENZ-BN-PAGE ZUR UNTERSUCHUNG DER RP2X* 2 REZEPTORSTOECHIOMETRIE 113 4.5.3 QUANTIFIZIERUNG DER INTERAGIERENDEN P2X-UNTEREINHEIT AN DER OBERFLAECHE ZUR UNTERSUCHUNG DER REZEPTORSTOECHIOMETRIE 116 4.5.4 EINZELMOLEKUELSPEKTROSKOPIE AN P2X, +2 - UND P2X M -KOMPLEXEN 120 4.5.5 SUBZELLULAERE VERTEILUNG KOEXPRIMIERTER RP2X,- UND RP2X 2 -UNTEREINHEITEN IN CHO-K1 -ZELLEN.. 130 5 DISKUSSION 135 5.1 STRUKTURELLE BETRACHTUNGEN VON P2X-REZEPTOREN 135 5.1.1 HETEROLOGE EXPRESSION DER HIS-RP2X,-UNTEREINHEIT IN P.PASTORIS 135 5.1.2 N-GLYKOSYLIERUNGSSTATUS UND ASSEMBLIERUNGSVERHALTEN IN P.PASTORIS EXPRIMIERTER HIS-RP2X,- UNTEREINHEITEN 137 5.1. INHALT V 8 ANHANG 178 8.1 KLONIERTE CDNA-KONSTRUKTE 178 8.2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 183 9 PUBLIKATIONEN 186 10 LEBENSLAUF 188
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