Allergene Risikoabschätzung einer genetisch modifizierten Maislinie im Vergleich zu der isogenen Kontrolllinie: Evaluierung der möglichen Untersuchungen und deren Aussagekraft: Report ; Endbericht zum BMGF-Projekt GZ 70420/0298 - IV/B/12/2005
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| adam_text | Bericht: Allergene Risikoabschätzung von GMO Mais
1 Inhaltsverzeichnis
Allergene Risikoabschätzung einer genetisch modifizierten Maislinie im Vergleich zu der isogenen
Kontrolllinie: Evaluierung der möglichen Untersuchungen und deren Aussagekraft 1
1 Inhaltsverzeichnis 2
2 Summary 4
3 Zusammenfassung 6
4 Einleitung 8
5 Fragestellung und Ziel des Projektes 15
6 Material und Methoden 16
6.1 Probenmaterial 16
6.2 Sequenzvergleich von Cry 1Ab und CP4 EPSPS mit bekannten Allergensequenzen - in silico
Analyse 16
6.3 Maisextrakte - Herstellung, Optimierung der Extrakte und Toxizitätsassays 16
6.3.1 Totalproteinextrakt - 4°C Extrakt 17
6.3.2 Extrakt für salzextrahierbare Proteine 17
6.3.3 Extrakt für alkoholextrahierbare Proteine 17
6.3.4 Gesamtextrakt 17
6.3.5 Birkenpollengesamtextrakt 17
6.3.6 4°C-Extrakt/Totalproteinextrakt 18
6.3.7 SEP/AEP 18
6.4 Physicochemische Untersuchung von GM Mais und isogener Maislinie 18
6.4.1 Nachweis von rCry 1Ab und rCP4 EPSPS (DNA) 18
6.4.2 Nachweis von rCry 1Ab und rCP4 EPSPS (Protein) 19
6.4.3 Substantielle Äquivalenz von GM Mais und Isogener Maislinie 19
6.4.4 Analyse der Zuckerzusammensetzung in Proteinextrakt GM Mais und isogene Linie... 19
6.4.5 Mikrobiologische Untersuchung der Maiskörner 19
6.4.6 Nachweis von Endotoxingehalt in den Proteinextrakten GM Mais und isogener Linie... 19
6.4.7 Toxizitätsassay 19
6.5 Immunologische Charakterisierung von GMO Proteinextrakt versus isogenem Proteinextrakt
20
6.5.1 Patientenseren 20
6.5.2 Immunblot und IgE ELISA 20
6.6 Mausmodell 20
6.6.1 Mäuse 20
6.6.2 Immunisierungsschema 21
6.6.3 Aufarbeitung der Proben 21
6.7 Statistik 22
7 Resultate 24
7.1 Sequenzvergleich von Cry 1Ab und CP4 EPSPS mit bekannten Allergensequenzen - in silico
Analyse 24
7.2 Physicochemische Charakterisierung der beiden Maislinien 25
7.2.1 DNA-Untersuchung 25
7.2.2 Proteinbestimmung und GMO-Nachweis 25
7.3 Substantielle Äquivalenzuntersuchung (GM Mais versus isogener Linie) 27
7.3.1 Zuckeranalyse 27
7.3.2 Mikrobiologische Untersuchung von Maiskörnern 28
7.3.3 Endotoxingehalt der Extrakte 28
7.3.4 Toxizitätsassay der Maisextrakte 29
7.4 Allergene Charakterisierung der Maisextrakte von GM Mais und isogener Kontrolllinie 30
7.4.1 Immunblot von GMO und NON-GMO Extrakt 30
7.5 Mausmodell 33
7.5.1 Versuch 1 und 2 33
7.5.2 Versuch 3 34
7.5.3 Versuch 4 37
7.5.4 Versuch 5 40
7.5.5 Geschlechtsspezifische Immunantwort 42
7.5.6 Einfluss des Endotoxingehalt auf die Immunisierungsexperimente 45
7.5.7 Vergleich Immunisierung von Black 6 Mäusen und BALB/c Mäusen .[ Z 48
Bericht: Allergene Risikoabschätzung von GMO Mais
8 Diskussion 54
9 Referenzen 62
10 Abkürzungen 67
11 Glossar 68
12 Acknowledgements 69
13 Liste der Abbildungen 70
14 Liste der Tabellen 72
15 Anhang 73
15.1 Proteinsequenzen von CP4 EPSPS und Cry 1Ab 73
15.2 Substantielle Äquivalenz GMO Mais und isogene Kontrolle 74
15.3 Rohdaten der Immunisierungsversuche 1-5 (Proteindaten und ELISA-Daten) 76
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