Regulation des Natrium-Dicarboxylat-Kotransporters durch Serum- und Glukokortikoid-abhängige Kinasen und Proteinkinase B:
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2007
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| Beschreibung: | Tübingen, Univ., Diss., 2007 |
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Funktionelle Charakteristik des Natrium-Dicarboxylat
Kotransporters (NaDC-1) 2
1.1.1 Struktur und Funktion des NaDC-1 2
1.1.2 Physiologische Bedeutung 4
1.2 Charakteristik der Proteinkinase B (PKB) 5
1.3 Serum- und Glukokortikoid-abhängige Kinase (SGK). 7
1.3.1 Struktur und Gewebeverteilung 7
1.3.2 Regulation der SGK 8
1.3.3 Physiologische Rolle. 10
1.4 Charakteristik von NHERF1 und -2 (Natrium/Hydrogen
Exchanger Regulatory Factor, NHERF) 11
1.5 Fragestellung 13
2 Material und Methodik 15
2.1 Lösungen und Substanzen 15
2.1.1 ND96 15
2.1.2 Variierte ND96 15
2.1.3 ND96-Oozyten-Aufbewahrungslösung 16
2.1.4 Kollagenase A. 16
2.1.5 OR-2 (Oozyten-Ringer, kalziumfrei). 17
2.1.6 Weitere verwendete Substanzen und Lösungsmittel 17
2.2 Geräte 17
2.3 Expressionssystem 18
2.3.1 Xenopus /aew s-Oozyten als Expressionssystem 18
2.3.2 Präparation der Oozyten 19
2.3.3 Injektion von cRNA in Oozyten 20
2.3.4 Inkubation der Oozyten 22
2.4 Elektrophysiologische Methoden 22
2.4.1 Two-Electrode-Voltage-Clamp (TEVC) 22
2.4.2 Potentialmessung (Current-Clamp). 25
2.5 Statistische Auswertung 25
3 Ergebnisse 27
3.1 Aktivität und Substratspezifität des NaDC-1 27
3.2 Analyse des Effektes von T308S47: dpkb auf NaDC-1 31
3.3 Einfluss der Serum- und Glukokortikoid-abhängigen
Kinase (SGK1) und ihrer Isoformen (SGK2 und SGK3)
auf NaDC-1 36
3.4 Kinetische Analyse von ™8.s473DpKB_ SGK1.
SGK3-Effekten auf NaDC-1 40
3.5 Zusammenfassung der Ergebnisse zur Wirkung
der Proteinkinase B und der Serum- und
Glukokortikoid-abhängigen Kinasen auf
Natrium-Dicarboxylat Kotransporter 43
3.6 Wirkung von NHERF1 und NHERF2 auf NaDC-1 44
3.7 Regulation des NaDC-1 durch Koinjektion
von T308,s473DpKB NHERF1 und NHERF2 46
3.8 Zusammenfassung der Ergebnisse zur regulierenden
Rolle von NHERF1 und NHERF2 auf NaDC-1 51
4 Diskussion 52
4.1 Anwendung der elektrophysiologischen Methoden bei den
Untersuchungen des Na*-Dicarboxylat Kotransporters 53
4.2 Endogene und exogene Leitfähigkeit im
Expressionssystem und Substratauswahl 55
4.3 Regulierende Effekte auf rNaOC-1 57
4.3.1 Regulation durch Proteinkinasen 58
4.3.2 Regulation durch NHERFs 62
5 Zusammenfassung 65
6 Literaturverzeichnis 67
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