Untersuchungen zur Auswirkung ausgewählter, intrazellulärer Mutationen im RET-Proto-Onkogen auf die Entstehung von medullären Schilddrüsen-Karzinomen:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.) EINLEITUNG
S. 1-
1.1.
PATHOMECHANISMUS DER TUMORENTSTEHUNG
1.2.
DAS RET-PROTO-ONKOGEN
1.3.
DIE EXPRESSION DES RET-PROTO-ONKOGENS
1.4.
LIGANDEN
1.5.
CO-REZEPTOREN
1.6.
DIE SIGNALKASKADE
1.7.
MIT MUTATIONEN IM RET ASSOZIIERTE ERKRANKUNGEN
1.8.
LOKALISATION UND PATHOMECHANISMUS
DER AUSLOESENDEN MUTATIONEN
1.9.
PHAENOTYP-GENOTYP KORRELATIONEN
1.10.
A UFGABENSTELLUNG
S. 1-2
S. 2-4
S. 4-5
S. 6
S. 6-7
S. 7-10
S. 11-15
S. 15-17
S. 17-20
S. 20-22
2.) MATERIAL UND METHODEN
S. 23-4
2.0.1
VERWENDETE REAGENZIEN, PUFFER UND LOESUNGEN
2.0.2 VERWENDETE LOESUNGEN UND PUFFER
2.0.3
VERWENDETE ANTIKOERPER
S. 23-24
S. 25-30
S. 30
2.1.1.
MUTAGENESE DURCH POLYMERASE-KETTEN-REAKTION S. 31-32
*
2.1.2.
UEBERPRUEFUNG DES AMPLIFIKATES MITTELS
FLACHBETT -ELEKTROPHORESE S. 33
2.1.3.
VERDAU DES AMPLIFIKATES MIT DPN I S. 33
2.1.4.
FAELLUNG DER PCR-ANSAETZE S. 33-34
/
2.1.5.
GIESSEN VON LB-AGARPLATTEN S. 34
2.1.6.
TRANSFORMATION S. 34
2.1.7.
ANSETZEN VON LB-MEDIUM S. 35
2.1.8.
MINIPRAEPARATION DER PLASMIDE S. 35
2.1.9.
KONTROLLVERDAU DER MINIPRAER-DNA S. 35-36
2.1.10.
MESSEN DER DNA-KONZENTRATION DER MINIPRAEPARATION S. 36
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/968443923
2.1.11.
UEBERPRUEFUNG DER DNA-SEQUENZ DER PLASMIDE
2.1.12.
MAXIPRAEPARATION
2.1.13.
EUKARYOTISCHE ZELLINIEN
2.1.14.
ZELLKULTURTECHNIK
2.1.15.
TRANSFEKTION MITTELS ELEKTROPORATION
2.1.16.
SELEKTION VON KLONEN
2.1.17.
AUFZUCHT VON KLONEN
2.1.18.
AUSSAEEN VON ZELLEN
2.1.19.
ERNTEN VON ZELLEN
2.1.20.
PROTEINBESTIMMUNG
2.1.21.
SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
2.1.22.
PROBENVORBEREITUNG
2.1.23.
WESTERN BLOT
2.
1.24. PONCEAU-FAERBUNG
2.1.25.
DETEKTION
2.
1.26. IMMUNPRAEZIPITATION
S. 36
S. 37
S. 37-38
S. 38-39
S39
S. 39
S. 40
S. 40
S. 40-41
S. 41
S. 41-42
S. 43
S. 43
S. 44
-
S. 44
S. 45-47
2.1.26.1.
2.1.26.2.
2.1.26.3.
2.1.26.4.
2.1.26.5.
2.1.26.6.
AUSSAEEN DER ZELLEN S. 45
INKUBATION MIT ANTIKOERPER S. 45
WASCHEN DER PROTEIN-BEADS, INKUBATION S. 45-46
WASCHEN DER KOMPLEXE S. 46
SDS-POLYACRYLAMIG-GEL-ELEKTROPHORESE S. 46
IMMUNOLOGISCHE DETEKTION S. 47
2.2.
ERSTELLEN EINES DREIDIMENSIONALEN MODELLS
DES RET-REZEPTORS S. 47
2.3.
SEQUENZVERGLEICHE MIT DER BIOLOGY WORKBENCH S. 47-48
3.) ERGEBNISSE
S.
3.0.
EINLEITUNG
3.1.
HERSTELLUNG DER VERWENDETEN KONSTRUKTE
3.2.
MORPHOLOGIE DER ZELLINIEN UND ZELLKLONE
S. 49
S. 49 -52
S. 53-58
49-67
II
3.3
WESTERN BLOT ANALYSEN S. 58-60
3.4.
IMMUNPRAEZIPITATIONEN S. 61-64
3.5.
ERSTELLEN EINES DREIDIMENSIONALEN BILDES
DER RET-KINASE-DOMAENE S. 65-67
4.) DISKUSSION
S. 68-79
4.1. GRUNDLEGENDE BEDEUTUNG DER UNTERSUCHUNG
DER MUTIERTEN RET-PROTOONKOGENE S. 68-69
4.2. KORRELATION ZWISCHEN MUTATION UND PHAENOTYP S. 69-70
4.3. PHAENOTYPISCHE VERAENDERUNGEN DER TRANSFORMIERTEN
ZELLEN S. 70-72
4.4. CHARAKTERISIERUNG DER MUTIERTEN RET-REZEPTOREN IM
WESTERN BLOT S. 72-73
4.5.
CHARAKTERISIERUNG DER MUTIERTEN RET-REZEPTOREN IN DER
IMMUNPRAEZIPITATION S. 73-76
4.6. MOEGLICHE MECHANISMEN ZUR AKTIVIERUNG DES
MUTIERTEN RET-REZEPTORS
S. 76-78
4.7. DISKUSSION DER EIGNUNG DER NIH 3T3-MAEUSEFIBROBLASTEN
ALS ZELLMODELL FUER DIE UNTERSUCHUNG DES RET-PROTO-
ONKOGENS
S. 78-79
5. ) ZUSAMMENFASSUNG S. 80-81
6. ) LITERATUR S. 82-99
/
7. ) DANKSAGUNGEN S. 100
8. ) LEBENSLAUF S. 101
9. ) ERKLAERUNG S. 102
III |
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