Untersuchungen zum Plasmidtransfer zwischen Mikroorganismen im Darm von ausgewählten Bodentieren:
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2002
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2002 |
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3
INHALTSVERZEICHNIS
VORABVEROEFFENTLICHUNGEN DER DISSERTATION.2
INHALTSVERZEICHNIS.3
ABKUERZUNGEN.6
A. EINLEITUNG.8
1. EINFUEHRUNG. 8
2. STAND DER FORSCHUNG. 8
2.1 TRANSFERMECHANISMEN DER PLASMIDE.10
2.2 ENTSTEHUNG REKOMBINANTER DARMBAKTERIEN DURCH PLASMIDTRANSFER.11
2.3 BODENTIERE ALS "HOT SPOT" FUER HORIZONTALEN PLASMIDTRANSFER.12
2.4 VERBREITUNG REKOMBINANTER PLASMIDE DURCH BODENTIERE.13
3. ZIELSETZUNGEN DIESER ARBEIT.14
B. MATERIAL UND METHODEN.16
1. CHEMIKALIEN, VERBRAUCHSMATERIAL UND GERAETE.16
1.1 CHEMIKALIEN, BIOCHEMIKALIEN UND WEITERE SPEZIELLE REAGEIAIEN.16
1.2 VERBRAUCHSMATERIAL.16
1.3 GERAETE.17
2. BODEN UND ORGANISMEN.17
2.1 BODEN.17
2.2 BAKTERIENSTAEMME UND PLASMIDE. 17
2.3 BODENTIERE.19
3. MIKROBIOLOGISCHE METHODEN.20
3.1 KULTURMEDIEN. 20
3.2 ZUSAETZE. 21
3.3 ANZUCHT VON BAKTERIEN. 22
4. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN.22
4.1 ISOLIERUNG VON DNA.22
4.1.1 PRAEPARATIVE PLASMID-ISOLIERUNG.22
4.1.2 PRAEPARATION VON GENOMISCHER DNA AUS BAKTERIENZELLEN.23
4.2 BEHANDLUNG VON DNA'MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN.23
4.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA IM AGAROSEGEL.24
4.4 ELUTION VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGEL.24
4.5 LIGATION VON VEKTOR UND GENKASSETTE.25
4.6 TRANSFORMATION VON ESCHERICHIA COLI.25
4.7 CHARAKTERISIERUNG VON DARMBAKTERIEN AUS BODENTIEREN.26
4.7.1 BIOLUMINESZENZ-NACHWEIS. 26
4.7.2 QUANTIFIZIERUNG DER LUZIFERASE-AKTIVITAET.27
4.7.3 ARDRA.27
4.7.4 BIOLOG-IDENTIFIZIERUNGSSYSTEM.28
4.7.5 DNA-SEQUENZIERUNG DES 16S RRNA-GENS.29
4.8 SOUTHEM-ANALYSE.31
4.8.1 TRANSFER VON DNA-FRAGMENTEN AUF NYLONMEMBRAN.32
4.8.2 MARKIERUNG VON DNA.32
4.8.3 DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG.34
4.8.4 DETEKTION MIT ANTIKOERPERN.34
5. VERSUCHE MIT BODENTIEREN.35
5.1 PRINZIP DER MODELLVERSUCHE.35
5.1.1 FUTTERHERSTELLUNG.35
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4
5.1.2 BAKTERIENKREUZUNGEN AUF FILTERMEMBRANEN.35
5.1.3 FTTTTENMGSEXPERIMENTE.37
5.1.4 ANALYSE DES KOTS AUS DEN MODELLVERSUCHEN.38
5.2 PLASMIDTRANSFER IN F. CANDIDA (ISOTOMIDAE, COLLEMBOLA).38
5.3 PLASMIDTRANSFER IN O. FTMATUS (ONYCHIURIDAE, COLLEMBOLA).40
5.4 PLASMIDTRANSFER IN L. RUBELLUS (LUMBRICIDAE, OLIGOCHAETA,
ANNELIDA).42
6. STATISTISCHE ANALYSEN.42
C. ERGEBNISSE.43
1
. KONSTRUKTION BIOLUMINESZENTER PLASMIDE.43
2. PLASMIDTRANSFER VERSUCHE MIT BODENTIEREN.45
2.1 ISOLIERUNG VON TRANSKONJUGANTEN AUS DEM DARM VON F. CANDIDA
(ISOTOMIDAE,
COLLEMBOLA).45
2.1.1 TRANSFER VON PLASMIDEN IN EINER MISCHUNG AUS E. CO/I-DONORSTAEMMEN
UND
KOTBAKTERIEN AUS F. CANDIDA AUF NYLONFILTER.45
2.1.2 LOKALISIERUNG DES PLASMIDTRANSFERORTES DURCH DEN NAEHRBODENZUSATZ
NALIDIXINSAEURE.47
2.1.3 PLASMIDTRANSFER AUF IM DARM VON
F. CANDIDA LEBENDE BAKTERIEN DURCH
FTTTTERUNGSEXPERIMENTE.48
2.1.4 NACHWEIS VON BIOLUMINESZENTEN TRANSKONJUGANTEN IN
F. CANC/UEIB-INDIVIDUEN AUS
FQTTERUNGSEXPERIMENTEN.51
2.1.5 PLASMIDTRANSFERRATE IN ABHAENGIGKEIT DER INDIVIDUENGROESSE IN
FUETTERUNGSEXPERIMENTEN.52
2.1.6 FEHLENDER PLASMIDTRANSFER MIT NICHT-MOBILISIERBAREN,
NICHT-KONJUGATIVEN
KLONIERUNGSVEKTOREN.53
2.2 NACHWEIS DES PLASMIDTRANSFERS LUZIFERASE-MARKIERTER BAKTERIEN NACH
FUETTERUNG AN
O. FIMATUS (ONYCHIURIDAE, COLLEMBOLA) UND MISCHUNG MIT KOTBAKTERIEN AUS
O.
FTMATUS AUF NYLONMEMBRANEN.54
2.2.1 PLASMIDTRANSFER IN BAKTERIELLEN KREUZUNGEN AUS
LUZIFERASE-MARKIERTEN
DONORBAKTERIEN UND KOTBAKTERIEN AUS
O. FIMATUS AUF NYLONMEMBRANEN.
55
2.2.2 ZEITLICHE ABHAENGIGKEIT DER BILDUNG VON TRANKONJUGANTEN IN
FUETTERUNGSEXPERIMENTEN MIT E. COLI S17-L/PRP4/WC.56
2.3 BETEILIGUNG VON L. RUBELLUS (OLIGOCHAETA, ANNELIDA) AN DER AUFNAHME
LUZIFERASE-
MARKIERTER PLASMIDE AUS
E. COLI DONORSTAEMMEN IM BODEN.57
2.3.1 POPULATION KULTIVIERBARER BAKTERIEN IM KOT.T.57
2.3.2 TRANSFER VON PLASMIDEN VON E. COLI NACH BAKTERIEN AUS DEM KOT VON
L. RUBELLUS
AUF NYLONMEMBRANEN.58
2.3.3 PLASMIDTRANSFER IN BODEN-MIKROKOSMEN MIT L. RUBELLUS.59
3 TAXONOMISCHE EINORDNUNG DER ISOLIERTEN TRANSKONJUGANTEN UND
TRANSFORMANTEN.61
3.1 PHYLOGENETISCHE DIVERSITAET DER AUS PLASMIDTRANSFERVERSUCHEN
ISOLIERTEN
DANNBAKTERIEN DREIER BODENTIERE.62
3.2 TAXONOMISCHE EINORDNUNG BIOLUMINESZENTER ISOLATE DURCH 16S RDNA-
SEQUENZIENMG.65
D. DISKUSSION.68
1. EINFLUSS VON MARKER- UND TRANSFERGENEN DER PLASMIDE AUF DEN
HORIZONTALEN
PLASMIDTRANSFER IN BODENTIEREN.68
2. WICHTIGE FAKTOREN ZUR ENTSTEHUNG REKOMBINANTER DARMBAKTERIEN WAEHREND
DER
DARMPASSAGE VON PLASMID-DNA.70
2.1 AUFNAHME VON REKOMBINANTEN DONOIZELLEN.70
2.2 UEBERLEBEN AUFGENOMMENER DONORSTAEMME.71
3. MODELLSYSTEM BODENTIER ALS ORT HORIZONTALEN PLASMIDTRANSFERS.73
3.1
PLASMIDTRANSFER IM DARM VON FOLSOMIA CANDIDA.73
5
3.2 PLASMICHRANSFER IM DANN VON
ONYCHIURUSFIMATUS.76
3.3 PLASMIDTRANSFER IM DARM VON LUMBRICUS RUBELLUS.77
4. ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNGEN ZUR VERBREITUNG GENTECHNISCH VERAENDERTER
MIKROORGANISMEN IN BEZUG AUF BIOLOGISCHE SICHERHEITSFORSCHUNG.80
E. ZUSAMMENFASSUNG.82
LITERATURVERZEICHNIS.85 |
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| Signatur: |
0001 DM 22389
Lageplan 1001 Diss.4 3117 Lageplan |
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| Exemplar 1 | Ausleihbar Am Standort |
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