Availability: Untersuchungen zur pathophysiologischen Relevanz von Polymorphismen im Kir6.2-Gen und der Gewebsselektivität von Katp-Kanal-Modulatoren

Untersuchungen zur pathophysiologischen Relevanz von Polymorphismen im Kir6.2-Gen und der Gewebsselektivität von Katp-Kanal-Modulatoren:

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Bibliographic Details
Main Author:	Meyer, Ulrike 1973- (Author)
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adam_text	UNTERSUCHUNGEN ZUR PATHOPHYSIOLOGISCHEN RELEVANZ VON POLYMORPHISMEN IM KIROE.2-GEN UND DER GEWEBSSELEKTIVITAET VON K A TP-KANAL-MODULATOREN VON DER GEMEINSAMEN NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER TECHNISCHEN UNIVERSITAET CAROLO-WILHELMINA ZU BRAUNSCHWEIG ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINER DOKTORIN DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.) GENEHMIGTE DISSERTATION VON ULRIKE MEYER AUS STENDAL INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN VI 1 EINLEITUNG 1 1.1 KALIUMKANAELE 1 1.2 MOLEKULARE STRUKTUR ATP-SENSITIVER KALIUM-KANAELE 1 1.3 K\| R 6.Y - DIE PORENBILDENDE UNTEREINHEIT DES K AT P-KANALS 2 1.4 SURX - DIE REGULATORISCHE UNTEREINHEIT DES K A TP-KANALS 4 1.4.1 NACHWEIS IN GEWEBEN 4 1.4.2 SULFONYLHARNSTOFFREZEPTOREN SIND ABC-PROTEINE 4 1.4.3 ISOFORMEN DES SULFONYLHAMSTOFFREZEPTORS UND IHRE GEWEBEVERTEILUNG 5 1.4.4 LOKALISATION DER BINDUNGSSTELLE FUER SULFONYLHARNSTOFFE 6 1.4.5 LOKALISATION DER BINDUNGSSTELLE FUER KALIUM-KANAL-OEFFNER 6 1.5 BEDEUTUNG VON K AT P-KANAELEN 7 S 1.5.1 K AT I^KANAELE IN DEN SS-ZELLEN DES PANKREAS 7 1.5.1.1 PHYSIOLOGISCHE BEDEUTUNG 7 1.5.1.2 MUTATIONEN IN SUR1 UND K, R 6.2 SIND URSACHE FUER PHHI 8 1.5.1.3 POTENTIELLE BEDEUTUNG VON K\|R6.2-POLYMORPHISMEN FUER DIE AUSBILDUNG VON TYP 2 DIABETES MELLITUS 9 1.5.2 K ATP -KANAELE IN NEURONEN 10 1.5.3 K A -RR-KANAELE IN HERZ UND SKELETTMUSKEL 11 1.5.4 K A TP-KANAELE IN GLATTER MUSKULATUR 11 1.6 MODULATOREN DER K ATR -KANALAKTIVITAET 12 1.6.1 CYTOSOLISCHE NUKLEOTIDE 12 1.6.2 SULFONYLHARNSTOFFE 13 1.6.3 KALIUM-KANAL-OEFFNER 14 1.6.3.1 KCOS BILDEN EINE STRUKTURELL SEHR HETEROGENE KLASSE VON SUBSTANZEN 14 1.6.3.2 DIAZOXID 15 1.6.3.3 PINACIDIL UND ANDERE CYANOGUANIDINE 16 1.6.3.4 WEITERE KALIUM-KANAL-OEFFNER 16 I INHALTSVERZEICHNIS 1.6.3.5 THERAPEUTISCHES POTENTIAL 17 1.6.3.6 GEWEBSSELEKTIVITAET DER KCOS 17 1.6.4 WEITERE SUBSTANZEN MIT WIRKUNG AUF K A JP-KANAELE 18 2 ZIELE DER ARBEIT 19 3 MATERIAL UND METHODEN 20 3.1 KULTIVIERUNG, PASSAGIERUNG UND KRYOKONSERVIENING VON COS 1-ZELLEN 20 3.1.1 LOESUNGEN UND MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR 20 3.1.2 KULTIVIERUNG VON COS 1-ZELLEN 21 3.1.3 UMSETZEN DER ZELLEN (PASSAGIEREN) 21 3.1.4 KRYOKONSERVIERUNG VON COSL-ZELLEN 22 3.2 HERSTELLUNG DER PUNKTMUTATIONEN 22 3.2.1 LOESUNGEN 22 3.2.2 PUNKTMUTATIONEN 23 3.2.2.1 VERWENDETE PLASMIDE 23 3.2.2.2 DESIGN DER OLIGONUKLEOTID-PRIMER 23 3.2.3 AUSFUEHRUNG DER PCR 24 3.2.4 KONTROLLE DES PCR-PRODUKTS 24 3.3 TRANSFORMATION UND PLASMIDPRAEPARATION 25 3.3.1 LOESUNGEN 25 3.3.2 HERSTELLUNG TRANSFORMATIONSKOMPETENTER BAKTERIEN 28 3.3.3 DURCHFUEHRUNG DER TRANSFORMATION 28 3.3.4 PLASMIDPRAEPARATION 28 3.3.5 SEQUENZIERUNG 29 3.4 TRANSFEKTION 29 3.4.1 LOESUNGEN 29 3.4.2 TRANSFEKTION MITTELS DEAE-DEXTRAN-METHODE 31 3.4.3 COTRANSFEKTION VON SURL MIT KIR6.2 W1 UND K\| R 6.2 E2 3K IM VERHAELTNIS 1:1 32 3.4.4 HISTOLOGISCHE LAC Z-FAERBUNG 3.4.4.1 LOESUNGEN 32 32 II INHALTSVERZEICHNIS 3.4.4.2 FAERBUNG 3.4.4.3 AUSWERTUNG DER FAERBUNG 3.5 MEMBRANPRAEPARATION 3.5.1 LOESUNGEN 3.5.2 PRAEPARATION VON MEMBRANEN AUS COSL-ZELLEN 3.6 PROTEINBESTIMMUNG 3.6.1 LOESUNGEN 3.6.2 DURCHFUEHRUNG DER PROTEINBESTIMMUNG 3.7 BINDUNGSEXPERIMENTE AN COS-MEMBRANEN 3.7.1 LOESUNGEN 3.7.1.1 LOESUNGEN DER RADIOLIGANDEN 3.7.1.2 STAMMLOESUNGEN DER EINGESETZTEN TESTSUBSTANZEN 3.7.2 VORBEREITUNG DER MEMBRANEN 3.7.3 GLEICHGEWICHTSBINDUNGSEXPERIMENTE 3.7.3.1 PRINZIP DES FILTRATIONSASSAYS 3.7.3.2 INKUBATIONEN 3.7.3.3 FILTRATION UND SZINTILLATIONSZAEHLUNG 3.8 SYNTHESE DES BPDZ 44 3.9 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE REGISTRIERUNGEN 3.9.1 LOESUNGEN 3.9.1.1 BASISLOESUNGEN 3.9.1.2 LOESUNGEN DER EINGESETZTEN NUKLEOTIDE 3.9.1.3 STAMMLOESUNGEN DER EINGESETZTEN TESTSUBSTANZEN 3.9.2 VORBEREITUNG DER ZELLEN 3.9.3 DURCHFUEHRUNG DER ELEKTROPHYSIOLOGISCHEN EXPERIMENTE 3.9.3.1 ALLGEMEINES 3.9.3.2 AUFBAU DES PATCH-CLAMP-SETUPS 3.9.3.3 HERSTELLUNG DER PIPETTEN 3.9.3.4 SEALBILDUNG UND PATCH-CLAMP-KONFIGURATIONEN 3.9.3.5 APPLIKATION DER TESTLOESUNGEN III 33 33 34 34 35 35 35 36 36 36 37 37 39 39 39 39 40 41 42 42 42 43 44 45 45 45 45 46 46 48 INHALTSVERZEICHNIS 3.10 DATENAUSWERTUNG 49 3.10.1 STATISTIK 49 3.10.2 BINDUNGSEXPERIMENTE 49 3.10.2.1 DISSOZIATIONSKINETIKEN 49 3.10.2.2 GLEICHGEWICHTSBINDUNGEN 50 3.10.2.3 DISSOZIATIONSKONSTANTEN 50 3.10.3 PATCH-CLAMP-EXPERIMENTE 50 3.10.3.1 AUSWERTUNG DER PATCH-CLAMP-EXPERIMENTE 50 3.10.3.2 KURVENPARAMETER 51 3.10.3.3 ERMITTLUNG VON OFFEN- 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INHALTSVERZEICHNIS 4.3 WIRKUNG AUSGEWAEHLTER NEUROLEPTIKA UND ANTIDEPRESSIVA AUF REKOMBINANTE SUR2A/- UND SUR2B/K IR 6.2-KANAELE 69 4.3.1 AFFINITAETEN DER SUBSTANZEN ZU SUR2B 70 4.3.2 AFFINITAETEN DER SUBSTANZEN ZU SUR2A 71 4.3.3 * SUR2B/K, R 6.2-KANAELE 72 4.3.4 SUR2A/K, R 6.2-KANAELE 74 5 DISKUSSION 75 5.1 E23K PRAEDISPONIERT FUER DIE ENTWICKLUNG EINES TYP 2 DIABETES MELLITUS 75 5.2 GEWEBSSELEKTIVITAET VON BPDZ 44 81 5.2.1 BPDZ 44 WIRKT ANTAGONISTISCH AN DER KCO-BINDUNGSSTELLE VON SUR2-ISOFORMEN 81 5.2.2 DIE POSITION DES STICKSTOFFATOMS IM PYRIDINRING VON BPDZ44 IST KRITISCH FUER DIE SELEKTIVITAET FUER SUR1/K, R 6.2-KANAELE 82 5.2.3 POTENTIELLE THERAPEUTISCHE BEDEUTUNG VON BPDZ 44 83 5.3 NEUROLEPTIKA UND ANTIDEPRESSIVA 84 5.3.1 NEUROLEPTIKA UND ANTIDEPRESSIVA ENTFALTEN IHRE INHIBITORISCHE WIRKUNG AUF K AT P-KANAELE DURCH INTERAKTION MIT DER SUR-UNTEREINHEIT 84 5.3.2 SUR2A/K W 6.2-KANAELE KOENNTEN AN DER VERMITTLUNG TOXISCHER EFFEKTE VON NEUROLEPTIKA UND ANTIDEPRESSIVA AM HERZEN 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