Neue Inhibitoren der Pektatlyase und Naturstoffe aus mykophilen Pilzen der Gattung Cladobotryum:
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1997
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adam_text | 454-3» - *NEUE INHIBITOREN DER PEKTATLYASE UND *NATURSTOFFE AUS
MYKOPHILEN PILZEN DER GATTUNG CLADOBOTRYUM VOM FACHBEREICH BIOLOGIE DER
UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES *DOKTOR
DER NATURWISSENSCHAFTEN GENEHMIGTE DISSERTATION (D 386) VORGELEGT VON
DIPL.-BIOL. CHRISTIAN WAGNER VORSITZENDER: 1. BERICHTERSTATTERIN: 2.
BERICHTERSTATTER: PROF. DR. H. HUBER PROF. DR. H. ANKE PROF. DR. J.
CULLUM TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE 11. JULI 1997
KAISERSLAUTERN 1997 INHALTSVERZEICHNIS SEITE 1. EINLEITUNG.. 2. MATERIAL
UND METHODEN 8 2.1. CHEMIKALIEN 8 2.2. MEDIEN, PUFFER, LOESUNGEN 11
2.2.1. NAEHRMEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 11 2.2.2. MEDIEN FUER DIE
ZELLKULTUREN 13 2.2.3. SALZLOESUNGEN UND PUFFER 14 2.3. ORGANISMEN 15
2.3.1. BEARBEITETE PILZSTAEMME 15 2.3.2. TESTSTAEMME FUER DIE BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN ..15 2.3.3. ZELLINIEN 16
2.3.4. PFLANZEN 17 2.3.5. NEMATODEN 17 2.4. FERMENTATION UND SCREENING
VON BASIDIO-, ASCO- UND ZYGOMYCETEN IN SUBMERSKULTUR 18 2.4.1. GEWINNUNG
DER ROHEXTRAKTE FUER DAS SCREENING 18 2.4.2. SCREENING NACH INHIBITOREN
DER PEKTATLYASE 18 2.4.3. FERMENTATION DER PRODUZENTENSTAEMME 19 2.4.3.1.
FERMENTATIONEN IN SUBMERSKULTUR 19 2.4.3.2. FERMENTATIONSANALYSEN 21
2.4.3.2.1. ABGASANALYTIK 21 2.4.3.2.2. GLUCOSE-/MALTOSEBESTIMMUNG 21
2.4.3.2.3. PH-WERT 22 2.4.3.2.4. MYZELTROCKENMASSE 22 2.4.3.2.5.
WIRKSTOFFBESTIMMUNG MITTELS ANALYTISCHER HPLC ..22 2.5. ISOLIERUNG UND
REINIGUNG DER WIRKSTOFFE 23 2.5.1. GEWINNUNG VON KULTURFILTRAT- UND
MYZELEXTRAKTEN 23 2.5.2. METHODEN ZUR ISOLIERUNG DER WIRKSTOFFE 23
2.5.2.1. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 23 2.6. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG DER WIRKSTOFFE 25 2.6.1. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 25
2.6.3. SPEKTROSKOPIE 26 2.7. PRAEPARATION DER PEKTATLYASE AUS FUSARIUM
SOLANI F. SP. PISI T 8 UND ANPASSUNG DES ENZYMTESTS DER PEKTATLYASE AN
EIN MIKROBIELLES SCREENING 27 2.7.1. PRAEPARATION DER PEKTATLYASE (EC
4.2.2.2.) AUS FUSARIUM SOLANI F. SP. PISI 27 2.7.1.1. KULTIVIERUNG UND
FERMENTATION VON FUSARIUM SOLANI F. SP. PISI 27 2.7.1.2. ULTRAFILTRATION
27 2.7.2. ANPASSUNG DES ENZYMTESTS AN DIE ERFORDERNISSE EINES
MIKROBIELLEN SCREENINGS ..27 2.7.2.1. AKTIVITAETSBESTIMMUNG DER
PEKTATLYASEN 27 2.7.2.2. TEMPERATURABHAENGIGKEIT DER PEKTATLYASEN 28
2.7.2.3. OPTIMIERUNG DES PH-WERTES IM TEST 28 2.7.2.4. OPTIMIERUNG DER
SUBSTRATKONZENTRATION 28 2.7.3. TBA-ASSAY 28 2.8. WEITERE BIOLOGISCHE
TESTS 29 2.8.1. AGARDIFFUSIONSTEST 29 2.8.2. REIHENVERDUENNUNGSTEST 30
2.8.3. PFLANZENKEIMUNGSTEST 31 2.8.4. CYTOTOXIZITAETSTESTS 31 2.8.4.1.
SUSPENSIONSKULTUREN 31 2.8.4.2. MONOLAYERKULTUREN 32 2.8.5. EINBAU
RADIOAKTIV MARKIERTER VORSTUFEN IN SAEUREFAELLBARES MATERIAL IN VIVO 32
2.8.6. REAKTION MIT L-CYSTEIN 33 2.8.7. HAEMOLYSETEST : 34 2.8.8.
THROMBOZYTENAGGREGATION 34 2.8.9. TEST AUF NEMATIZIDE EIGENSCHAFTEN 34
2.8.10. MUTAGENITAETSTEST NACH ARNES 34 3. ERGEBNISSE 36 3.1. ASSAY DER
PEKTATLYASE 36 3.2. WIRKUNG BEKANNTER SEKUNDAERMETABOLITEN AUF DIE
PEKTATLYASEN 44 3.3. SCREENING 46 3.4. FERMENTATION UND ISOLIERUNG DER
ENZYMHEMMSTOFFE 47 3.4.1. VERTICILLIUM REXIANUM UR 573: PRODUZENT VON
MONACOLIN K 47 3.4.1.1. VERTICILLIUM REXIANUM UR 573 47 3.4.1.2.
FERMENTATION VON VERTICILLIUM REXIANUM UR573 48 3.4.1.3. REINIGUNG VON
MONACOLIN K AUS DEM KULTURFILTRAT VON VERTICILLIUM REXIANUM UR 573 50
3.4.1.4. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON MONACOLIH K 51
3.4.2. MUCOR SPEC. KL 36-94 ALS PRODUZENT EINES INHIBITORS DER
PEKTATLYASE AUS ERWINIA CAROTOVORA 53 3.4.2.1. ZYGOMYCET MUCOR SPEC. KL
36-94 *. 53 3.4.2.2. FERMENTATION VON MUCOR SPEC. KL 36-94 54 3.4.2.3.
REINIGUNG VON CW 36-94-1 AUS DEM KULTURFILTRAT VON MUCOR SPEC. KL 36-94
55 3.4.2.4. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON CW 36-94-1 56
3.5. NEUE UND BEKANNTE NATURSTOFFE AUS MYKOPHILEN PILZEN DER GATTUNG
CLADOBOTRYUM 59 3.5.1. CLADOBOTRYUM RUBROBRUNNESCENS (UR 752) : ...59
3.5.1.1. FERMENTATION VON CLADOBOTRYUM RUBROBRUNNESCENS UR 752. 60
3.5.1.2. REINIGUNG VON BRUNNESCIN UND FLAVIPUCIN AUS DEM KULTURFILTRAT
VON CLADOBOTRYUM RUBROBRUNNESCENS UR 752 62 3.5.1.3.
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON BRUNNESCIN 63 3.5.1.4.
REINIGUNG VON CLADOBOTRIN UND CW 752-4 AUS CLADOBOTRYUM
RUNBROBRUNNESCENS 65 3.5.1.5. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG
VON CLADOBOTRIN 66 3.5.1.6. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON
CW 752-4 68 3.5.2. VERGLEICHENDE FERMENTATION VERSCHIEDENER ARTEN DER
GATTUNG CLADOBOTRYUM 70 3.6. MUCOR SPEC. KL 94-205 ALS NEUER PRODUZENT
VON CURVULARIN ....73 3.6.1. MUCOR SPEC . KL 94-205 73 3.6.2.
FERMENTATION VON MUCOR SPEC. KL 94-205 .....74 3.6.3. REINIGUNG VON
S-CURVULARIN AUS DEM KULTURFILTRAT VON MUCOR SPEC. KL 94-205....: 75
3.6.4. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON S-CURVULARIN 76 3.7.
BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG ; 79 3.7.1. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG
DER HEMMSTOFFE DER PEKTATLYASE, MONACOLIN K UND CW 36-94-1 79 3.7.1.1.
EINFLUSS VON MONACOLIN K UND CW 36-94-1 AUF DIE PEKTATLYASE 79 3.7.1.2.
BAKTERIEN UND PILZE 84 3.7.1.3. CYTOTOXIZITAETSTEST 88 3.1.1.4. EINFLUSS
AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN IN VIVO 88 3.7.1.5. HAEMOLYSETEST 89
3.7.1.6. REAKTION MIT L-CYSTEIN 89 3.7.1.7. PFLANZENKEIMUNGSTEST 90
3.7.1.8. TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET 90 3.7.1.9.
THROMBOCYTENAGGREGATION 90 3.7.2. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON
FLAVIPUCIN, BRUNNESCIN, CLADOBOTRIN, CW 752-4 UND S-CURVULARIN 91
3.7.2.1. BAKTERIEN UND PILZE 91 3.7.2.2. CYTOTOXIZITAETSTEST 94 3.7.2.3.
EINFLUSS AUF DIE MAKROMOLEKUELBIOSYNTHESE IN VIVO 94 3.7.2.4. HAEMOLYSETEST
96 3.7.2.5. REAKTION MIT L-CYSTEIN 96 3.7.2.6. PFLANZENKEIMUNGSTEST 96
3.7.2.7. TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET 97 3.7.2.8.
THROMBOCYTENAGGREGATION 97 3.7.2.9. ARNES-TEST AUF MUTAGENE
EIGENSCHAFTEN 97 4. DISKUSSION 98 4.1. IN VITRO TESTSYSTEM ZUR SUCHE
NACH HEMMSTOFFEN DER PEKTATLYASE 99 4.2. SCREENING NACH HEMMSTOFFEN DER
PEKTATLYASE 102 4.3. HEMMSTOFFE DER PEKTATLYASE 102 4.3.1.
UNTERSUCHUNGEN ZUR SPEZIFITAET DER WIRKSTOFFE 107 4.3.2. VERTICILLIUM
REXIANUM, EIN NEUER PRODUZENT VON MONACOLIN K 110 4.3.3. MUCOR SPEC. KL
36-94 ALS PRODUZENT EINES INHIBITORS DER PEKTATLYASE AUS E. CAROTOVORA
112 4.4. NEUE UND BEKANNTE BIOLOGISCH AKTIVE NATURSTOFFE AUS MYKOPHILEN
PILZEN DER GATTUNG CLADOBOTRYUM 113 4.5. MUCOR SPEC. KL 94-205 ALS NEUER
PRODUZENT VON CURVULARIN 118 5. ZUSAMMENFASSUNG 120 6. LITERATUR 121
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Bibliotheksmagazin
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0001 DA 98 200
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