Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Anti-T-Zell- und Anti-Makrophagen-Therapeutika in der Adjuvansarthritis der Ratte:
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1996
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| adam_text | F UNTERSUCHUNGEN ZUM WIRKUNGSMECHANISMUS VON ANTI-T-ZELL- UND
ANTI-MAKROPHAGEN- THERAPEUTIKA IN DER ADJUVANSARTHRITIS DER RATTE DEN
NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAETEN DER FRIEDRICH-ALEXANDER-UNIVERSITAET
ERLANGEN-NUERNBERG ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES VORGELEGT VON CARSTEN
B. SCHMIDT-WEBER AUS ERLANGEN MAERZ 1996 INHALTSVERZEICHNIS 3 LISTE DER
ABBILDUNGEN 9 ABKUERZUNGEN 13 1. ZUSAMMENFASSUNG 14 2. EINLEITUNG 16 2.1.
DIE HUMANE RHEUMATOIDE ARTHRITIS (RA) 16 2.1.1. PATHOGENESE DER RA 16
2.1.2. BEDEUTUNG VON T-ZELLEN UND MAKROPHAGEN IN DER RA 16 2.1.3.
MECHANISMEN KONVENTIONELLER BEHANDLUNGSPRINZIPIEN 21 2.2. DIE
ADJUVANSARTHRITIS (AA) DER RATTE 23 2.2.1. PATHOGENESE DER AA 24 2.2.2.
BEDEUTUNG VON MAKROPHAGEN UND T-ZELLEN IN DER AA 26 2.2.3.
ARBEITSHYPOTHESE ZUR PATHOGENESE DER AA 27 2.3. VERWENDETE THERAPEUTIKA
28 2.3.1. ANTI-CD4 MONOKLONALE ANTIKOERPER (MAK) 29 2.3.2.
CLODRONAT-LIPOSOMEN 32 2.4. FRAGESTELLUNG UND EXPERIMENTELLES DESIGN 35
3. ERGEBNISSE 38 3.1. EFFEKTE DER BEHANDLUNG MIT ANTI-CD4 MAK 38 3.1.1.
BEHANDLUNG DER ETABLIERTEN AA 38 3.1.1.1. KLINISCHE EFFEKTE 38 3.1.2.
PRAEVENTIVE BEHANDLUNG DER AA 38 3.1.2.1. KLINISCHE EFFEKTE 38 3.1.2.2.
ZYTOFLUOROMETRISCHE ANALYSE DER MONONUKLEAEREN ZELLEN AUS DEM PERIPHEREN
BLUT VON ANTI-CD4 MAK-BEHANDELTEN RATTEN 38 3.1.2.2.1. EFFEKTE DES
ANTI-CD4 MAK W3/25 41 3.1.2.2.1.1. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK W3/25 AUF
T-ZELLEN DES PERIPHEREN BLUTES BEI NORMALEN TIEREN 41 3.1.2.2.1.2.
EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK W3/25 AUF T-ZELLEN DES PERIPHEREN BLUTES BEI
ARTHRITISCHEN TIEREN 45 3.1.2.2.2. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK 0X35 48
3.1.2.2.3. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK RIB5/2 48 4 3.1.2.2.4. UEBERSICHT
UEBER DIE ZYTOFLUOROMETRISCHEN ERGEBNISSE 49 3.1.2.3. DELAYED-TYPE
HYPERSENSITIVITY (DTH) 50 3.1.2.4. VERTEILUNG DER ISOTYP-SUBKLASSEN VON
SERUMANTIKOERPERN NACH BEHANDLUNG MIT ANTI-CD4 MAK 50 3.1.2.4.1.
VERTEILUNG DER ISOTYP-SUBKLASSEN DER GESAMT- SERUMANTIKOERPER NACH
BEHANDLUNG MIT ANTI-CD4 MAK 51 3.1.2.4.2. VERTEILUNG DER
ISOTYP-SUBKLASSEN DER MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS-SPEZ F SCHEN
SERUMANTIKOERPER NACH BEHANDLUNG MIT ANTI-CD4 MAK 51 3.1.2.5. IN VITRO
REAKTIVITAET VON MILZZELLEN NACH BEHANDLUNG MIT ANTI-CD4 MAK 53
3.1.2.5.1. GESAMT-T-ZELL-POPULATION 53 3.1.2.5.1.1. POLYSPEZIFISCHE
STIMULATION MIT CONCANAVALIN A 53 3.1.2.5.1.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE
STIMULATION MIT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS 53 3.1.2.5.2. CD4 +
T-ZELL-POPULATION 53 3.1.2.5.2.1. POLYSPEZIFISCHE STIMULATION MIT
CONCANAVALIN A 55 3.1.2.5.2.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE STIMULATION MIT
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS 55 3.1.2.5.3. CD8* T-ZELL-POPULATION 57
3.1.2.5.3.1. POLYSPEZIFISCHE STIMULATION MIT CONCANAVALIN A 57
3.1.2.5.3.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE STIMULATION MIT MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS 57 3.2. EFFEKTE DER BEHANDLUNG MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 57
3.2.1. BEHANDLUNG DER ETABLIERTEN AA 61 3.2.1.1. KLINISCHE EFFEKTE 61
3.2.1.2. DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY (DTH) 61 3.2.1.3. IN VITRO
REAKTIVITAET VON MILZZELLEN NACH BEHANDLUNG MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 63
3.2.1.3.1. GESAMT-T-ZELL-POPULATION 64 3.2.1.3.1.1. POLYSPEZIFISCHE
STIMULATION MIT CONCANAVALIN A 64 3.2.1.3.1.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE
STIMULATION MIT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS 64 3.2.1.3.2. CD4 +
T-ZELL-POPULATION 64 3.2.1.3.2.1. POLYSPEZIFISCHE STIMULATION MIT
CONCANAVALIN A 66 3.2.1.3.2.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE STIMULATION MIT
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS 66 3.2.1.3.3. CD8 + T-ZELL-POPULATION 66
3.2.1.3.3.1. POLYSPEZIFISCHE STIMULATION MIT CONCANAVALIN A 66
3.2.1.3.3.2. ANTIGEN-SPEZIFISCHE STIMULATION MIT MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS 66 3.2.1.4. MAKROPHAGEN-DEPLETION NACH BEHANDLUNG MIT
CLODRONAT-LIPOSOMEN 66 3.2.1.4.1. HISTOPATHOLOGISCHE ANALYSE VON
SYNOVIALMEMBRAN, POPLITEALEM LYMPHKNOTEN, MILZ UND LEBER 66 3.2.1.4.2.
ZYTOFLUOROMETRISCHE ANALYSE VON KNOCHENMARKSZELLEN 69 3.2.2. PRAEVENTIVE
BEHANDLUNG DER AA MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 71 3.2.2.1. KLINISCHE EFFEKTE
73 3.2.2.2. DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY (DTH) 73 3.2.3. WIRKUNG VON
CLODRONAT-LIPOSOMEN AUF ZELLULAERER EBENE 73 3.2.3.1. INKORPORATION VON
FLUORESZENZ-MARKIERTEN PBS-LIPOSOMEN 74 3.2.3.1.1. MONOZYTEN 74
3.2.3.1.2. POLYMORPHKERNIGE LEUKOZYTEN (PMN) 75 3.2.3.1.3. T-ZELLEN 75
3.2.3.1.4. ENDOTHELZELLEN 75 3.2.3.1.5. FIBROBLASTEN 75 3.2.3.2.
ZYTOTOXIZITAET VON CLODRONAT-LIPOSOMEN MIT HOHER UND NIEDRIGER
CLODRONAT-KONZENTRATION 75 3.2.3.2.1. MONOZYTEN 75 3.2.3.2.2.
POLYMORPHKERNIGE LEUKOZYTEN (PMN) 78 3.2.3.2.3. T-ZELLEN 78 3.2.3.2.4.
ENDOTHELZELLEN 780 3.2.3.2.5. FIBROBLASTEN 80 3.2.3.3. INKUBATION VON
MAKROPHAGEN MIT LIPOSOMEN KONVENTIONELLER LIPID-ZUSAMMENSETZUNG 81
3.2.3.3.1. INKORPORATION VON PHOSPHATIDYLCHOLIN (PC) LIPOSOMEN 80
3.2.3.3.2. ZYTOTOXIZITAET VON CLODRONAT-PC-LIPOSOMEN 81 3.2.3.4.
ULTRASTRUKTURELLE ANALYSE NACH INKUBATION MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 81
3.2.3.4.1. MONOZYTEN - 8 1 3.2.3.4.2. POLYMORPHKERNIGE LEUKOZYTEN
(PMN) 81 3.2.3.5. GEL-ELEKTROPHORESE DER NUKLEAREN DNA MIT
CLODRONAT-LIPOSOMEN 81 3.2.3.5.1. MONOZYTEN 84 3.2.3.5.2.
POLYMORPHKERNIGE LEUKOZYTEN (PMN) 84 4. DISKUSSION 86 4.1. KLINISCHE
EFFEKTE VON ANTI-CD4 MAK UND CLODRONAT-LIPOSOMEN IN DER ETABLIERTEN
ARTHRITIS UND BEI PRAEVENTIVER BEHANDLUNG DER ARTHRITIS 86 4.1.1.
KLINISCHE EFFEKTE DER ANTI-CD4 MAK-BEHANDLUNG 86 4.1.1.1. KLINISCHE
EFFEKTE DER ANTI-CD4 MAK-BEHANDLUNG IN DER ETABLIERTEN ARTHRITIS 86
4.1.1.2. KLINISCHE EFFEKTE DER ANTI-CD4 MAK BEI PRAEVENTIVER BEHANDLUNG
DER ARTHRITIS 87 4.1.2. KLINISCHE EFFEKTE DER
CLODRONAT-LIPOSOMEN-BEHANDLUNG 88 4.1.2.1. KLINISCHE EFFEKTE DER
CLODRONAT-LIPOSOMEN-BEHANDLUNG IN DER ETABLIERTEN ARTHRITIS 88 4.1.2.2.
KLINISCHE EFFEKTE DER CLODRONAT-LIPOSOMEN BEI PRAEVENTIVER BEHANDLUNG DER
ARTHRITIS 89 4.2. MECHANISMEN DER ERFOLGREICHEN THERAPIE-ANSAETZE 90
4.2.1. PRAEVENTIVE BEHANDLUNG DER AA MIT ANTI-CD4 MAK 90 4.2.1.1. EINFLUSS
DES ISOTYPS DER BEHANDLUNGSANTIKOERPER 90 4.2.1.2. CD4-MODULATION UND
DEPLETION VON CD4 + T-ZELLEN 91 4.2.1.2.1. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK
W3/25 91 4.2.1.2.1.1. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK W3/25 AUF NORMALE TIERE
91 4.2.1.2.1.2. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK W3/25 AUF ARTHRITISCHE TIERE 92
4.2.1.2.2. EFFEKTE DES ANTI-CD4 MAK OX3 5 93 4.2.1.2.3. EFFEKTE DES
ANTI-CD4 MAK RIB5/2 93 4.2.1.3. ISOTYP-SUBKLASSEN DER SERUMANTIKOERPER 94
4.2.1.4. T-ZELL-REAKTIVITAET 95 4.2.1.4.1. DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY
REAKTION GEGEN MT NACH PRAEVENTIVER ANTI-CD4-BEHANDLUNG 95 4.2.1.4.2.
T-ZELL-REAKTIVITAET NACH STIMULATION IN VITRO 95 4.2.1.4.2.1. REAKTIVITAET
DER GESAMT-T-ZELLEN 95 4.2.1.4.2.2. REAKTIVITAET DER CD4 + T-ZELLEN 96
4.2.1.4.2.3. REAKTIVITAET DER CD8 + T-ZELLEN 97 4.2.1.5. MECHANISMEN DER
ANTI-CD4-THERAPIE 98 4.2.2. BEHANDLUNG DER ETABLIERTEN AA MIT
CLODRONAT-LIPOSOMEN 99 4.2.2.1. DEPLETION DER MAKROPHAGEN IN VIVO 99
4.2.2.1.1. LOKALE UND REGIONALE DEPLETION 99 4.2.2.1.2. SYSTEMISCHE
DEPLETION 101 4.2.2.2. EFFEKTE DER ANTI-MAKROPHAGEN BEHANDLUNG AUF DIE
T-ZELL-REAKTIVITAET 101 4.2.2.3. SELEKTIVITAET DER LIPOSOMEN 102
4.2.2.3.1. INKORPORATION VON TOXIN-FREIEN LIPOSOMEN 102 4.2.2.3.2.
TOXIZITAET VON PEG-S CLODRONAT-LIPOSOMEN 103 4.2.2.3.3. EINFLUSS DER
LIPID-KOMPOSITION DER CLODRONAT-LIPOSOMEN AUF DIE TOXIZITAET 104
4.2.2.3.4. MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN NACH PHAGOZYTOSE VON PEG-S
CLODRONAT-LIPOSOMEN 105 4.2.2.4. MECHANISMUS DER
ANTI-MAKROPHAGEN-THERAPIE 105 4.3. THERAPEUTISCHE EINGRIFFSMOEGIICHEITEN
105 4.4. SCHLUSSFOLGERUNG UND AUSSICHTEN 106 5. MATERIAL UND METHODEN 107
5.1. VERWENDETE THERAPEUTIKA 107 5.1.1. FREIE CLODRONATLOESUNG 107 5.1.2.
PBS- UND CLODRONAT-LIPOSOMEN 107 5.1.3. ANTI-CD4 MONOKLONALE ANTIKOERPER
(MAK) 108 5.2. TIERE UND HALTUNGSBEDINGUNGEN 108 5.3. AUSLOESUNG DER
ADJUVANSARTHRITIS 108 5.4. BEHANDLUNGSPROTOKOLLE 108 5.4.1.
BEHANDLUNGSPROTOKOLLE MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 108 5.4.1.1. PRAEVENTIVE
BEHANDLUNG 108 5.4.1.2. BEHANDLUNG DER ETABLIERTEN AA 108 5.4.2.
BEHANDLUNGSPROTOKOLLE MIT ANTI-CD4 MONOKLONALEN ANTIKOERPERN 109 5.4.2.1.
PRAEVENTIVE BEHANDLUNG DER AA 109 5.4.2.2. BEHANDLUNG DER ETABLIERTEN AA
109 5.5. BEWERTUNG DER ARTHRITIS 109 5.5.1. KLINISCHE BEWERTUNG 109
5.5.2. PFOTENVOLUMEN 109 5.5.3. KOERPERGEWICHT 109 5.6. DELAYED-TYPE
HYPERSENSITIVITY (DTH) 109 5.7. HISTOPATHOLOGISCHE UND
IMMUNHISTOCHEMISCHE AUSWERTUNGEN HO 5.7.1. HISTOPATHOLOGISCHE ANALYSE
110 5.7.2. IMMUNHISTOLOGISCHE ANALYSE HO 5.7.3. ZYTOFLUOROMETRISCHE
ANALYSE VON LEUKOZYTEN UND KNOCHENMARKSZELLEN 111 5.8. BESTIMMUNG DER
ISOTYP-SUBKLASSEN VON SERUMANTIKOERPERN 111 5.8.1. BESTIMMUNG DER
ISOTYP-SUBKLASSEN DER GESAMT-SERUMANTIKOERPERN 111 5.8.2. BESTIMMUNG
DER ISOTYP-SUBKLASSEN VON MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS- SPEZIFISCHEN
SERUMANTIKOERPERN 112 5.9. IN VITRO T-ZELLREAKTIVITAET 112 5.9.1.
GEWINNUNG VON T-ZELLEN AUS RATTEN MIT AA 112 5.9.2. ANREICHERUNG VON
DENDRITISCHEN ZELLEN 113 5.9.3. 3 H-THYMIDINEINBAU-EXPERIMENTE 113 5.10.
IN VITRO EFFEKTE VON CLODRONAT-LIPOSOMEN 113 5.10.1. FLUORESZENZFAERBUNG
VON LIPOSOMEN 114 5.10.2. GEWINNUNG VON MONOZYTEN 114 5.10.3. GEWINNUNG
VON T-ZELLEN 114 5.10.4. GEWINNUNG VON ENDOTHELZELLEN 114 5.10.5.
GEWINNUNG VON FIBROBLASTEN 115 5.10.6. INKUBATION VON GEREINIGTEN
MONOZYTEN MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 115 5.10.7. INKUBATION VON VOLLBLUT
MIT CLODRONAT-LIPOSOMEN 115 5.10.7.1. GEWINNUNG VON POLYMORPHKERNIGEN
LEUKOZYTEN (PMN) 115 5.10.7.2. GEWINNUNG VON T-ZELL-DEPLETIERTEN
MONONUKLEAEREN ZELLEN 116 5.10.8. INKORPORATION VON LIPOSOMEN 116 5.10.9.
MESSUNGDER ZELLVITALITAET 116 5.10.10.
TRANSMISSIONS-ELEKTRONENMIKROSKOPIE 117 5.10.11. GEL-ELEKTROPHORESE DER
NUKLEAREN DNA 117 5.11. STATISTISCHE ANALYSE 117 6. LITERATURVERZEICHNIS
119 7. BIBLIOGRAPHIE 129 8. DANKSAGUNGEN 132 9. LEBENSLAUF 133
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